[发明专利]一株能够利用木糖的酵母Spathaspora passalidarum的表达系统

权利要求书

1.一株能够利用木糖的酵母Spathaspora passalidarum的表达系统，其特征在于包括能够利用木糖的酵母Spathaspora passalidarum以及一种表达载体，所述表达载体从5’-3’依次包括以下可操作性元件：

pMD19-Tsimple质粒骨架、rDNA同源重组序列、外源基因表达盒和筛选标记基因表达盒；

所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括启动子、外源基因插入酶切位点以及转录终止子；

所述筛选标记基因表达盒包括启动子、抗生素抗性基因、转录终止子；

所述rDNA同源重组序列为18s rDNA序列；设计两条引物截取Spathasporapassalidarum 18s rDNA部分序列作为同源重组位点；引物序列如下：

P1：5’GCCGGAATTCTGCCAGTAGTCATATGCTTGTCTC3’

P2：5’ATATTAGGGGTACCCGGGATCCGAAGATCTGTTGAAGAGCAATAAT3’；

所述外源基因表达盒中的启动子为SpADH_P、或SpXYL_P；转录终止子为SpCYC1_T、或SpXYL_T；

所述筛选标记基因表达盒中的启动子为SpTEF1_P；抗生素抗性基因为潮霉素抗性基因、博来霉素抗性基因、或G418；转录终止子为SpCYC1_T、或ScCYC1_T；

所述的18s rDNA序列如SEQ ID NO:1所示；

所述的SpADH_P启动子为Spathaspora passalidarum来源的乙醇脱氢酶基因ADH1启动子，该启动子的DNA序列如SEQ ID NO:2所示；

所述的SpXYL_P启动子为Spathaspora passalidarum来源的木糖还原酶基因XYL启动子，该启动子的DNA序列如SEQ ID NO:3所示；

所述的SpTEF1_P启动子为Spathaspora passalidarum来源的转录起始因子基因TEF1启动子，该启动子的DNA序列如SEQ ID NO:4所示；

所述的SpCYC1_T终止子为Spathaspora passalidarum来源的细胞色素C基因CYC1终止子，该终止子的DNA序列如SEQ ID NO:5所示；

所述的SpXYL_T终止子为Spathaspora passalidarum来源的木糖还原酶基因XYL终止子，该终止子的DNA序列如SEQ ID NO:6所示；

所述的ScCYC1_T终止子为Saccharomyces cerevisiae来源的细胞色素C基因CYC1终止子，该终止子的DNA序列如SEQ ID NO:7所示；

所述的潮霉素抗性基因的DNA序列如SEQ ID NO:8所示；所述潮霉素抗性基因以pRS303H质粒DNA为模板；

所述的博来霉素抗性基因的DNA序列如SEQ ID NO:9所示；

所述的G418的DNA序列如SEQ ID NO:10所示；

所述的酵母Spathaspora passalidarum保藏于美国农业研究菌种保藏中心，保藏编号为NRRL Y-27907。

2.权利要求1中所述的表达载体在宿主菌Spathaspora passalidarum遗传转化中的应用；所述的宿主菌Spathaspora passalidarum保藏于美国农业研究菌种保藏中心，保藏编号为NRRL Y-27907。

3.权利要求1所述的一株能够利用木糖的酵母Spathaspora passalidarum的表达系统的用途，其特征在于用于表达外源蛋白和宿主菌自身代谢工程改造。