[发明专利]促进水产动物肠道健康的复合微生物菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种促进水产动物肠道健康的复合微生物菌剂及其制备方法。

背景技术

近几年来食品安全备受关注，水产品的健康养殖势在必行，目前在水产养殖过程中，多数使用光合细菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌等微生物制剂改善养殖环境，降低疾病的发生，取得了较好的效果，然而水产养殖动物的疾病发生还与水产动物机体本身有关，因此这几年来针对水产动物肠道健康的研究较多，其中也有一部分利用微生物促进水产动物的肠道健康。如罗源、江海英等申请的中国专利（专利号：201210029204.9）公开了一种短小芽孢杆菌、益生菌制剂及其制备方法和应用。发明的有益效果是：利用短小芽孢杆菌具有强的胞外蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性，对弧菌具有广泛的抑制性，起到抑制对虾肠道病原弧菌生长、减少对虾弧菌病的发生，同时促进对虾生长、降低饵料系数；但其缺陷在于：对病原菌的抑制性较为单一，只提及对弧菌类病原菌有广泛的抑制作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种促进水产动物肠道健康的复合微生物菌剂，并同时揭露了该复合微生物菌剂的制备方法。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

一种促进水产动物肠道健康的复合微生物菌剂，其由以下质量百分数的组分组成：

经培养、浓缩及固化后的菌株FA08   5-25%；

经扩培、浓缩与固定后的菌株DS31  10-25%；

余量为载体；

其中：载体为硅藻土或沸石粉或麦饭石粉，且硅藻土、沸石粉、麦饭石粉的粉碎细度均为120-250目；

所述菌株FA08为地衣芽孢杆菌菌株FA08（Bacillus licheniformis），于2014年08月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No:9544；

所述菌株DS31为干酪乳杆菌菌株DS31（Lactobacillus casei），于2014年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No:10073。

同时揭露了上述促进水产动物肠道健康的复合微生物菌剂的制备方法，其具体步骤为：

（1）地衣芽孢杆菌菌株FA08的培养：取所述的地衣芽孢杆菌菌株FA08（Bacillus licheniformis）并将其接种至LB培养基中，且于28-40℃、150-200rpm下活化培养5-10h；活化好即得种子液，接着按1-10%接种量将种子液接种至LB培养基，并于28-40℃、150-200rpm条件下培养12-24h；

（2）地衣芽孢杆菌菌株FA08的浓缩与固化：将经步骤（1）培养所得的菌液置于8000-10000rpm离心5-10min，弃上清得湿菌液；于所得湿菌液中添加粉碎细度为120-250目的硅藻土或麦饭石粉或沸石粉50g/L-2000g/L， 之后30-40℃条件下进行干燥，得固化后的地衣芽孢杆菌菌株FA08，备用；

（3）干酪乳杆菌菌株DS31的扩培：取所述的干酪乳杆菌菌株DS31（Lactobacillus casei）并将其接种至MRS培养基中，且于30-45℃、摇床150-200rpm下活化培养5-10h；活化好即得种子液，接着按1-10%接种量将种子液接种至MRS培养基，并于30-45℃、摇床150-200rpm条件下培养12-24h；

（4）菌株吸附：于步骤（3）扩培后的菌液中添加粉碎细度120-250目的硅藻土或麦饭石粉或沸石粉50g/L-2000g/L，并于100-150rpm下吸附1-5h；

（5）浓缩与固定：步骤（4）吸附后的菌液于8000-10000rpm下离心5-10min，弃上清得湿菌液，并加入0.1-1.0ml/L的保护剂，30-40℃搅拌干燥，得固定后的干酪乳杆菌菌株DS31，备用；

（6）复配：先按照下列质量百分数称取组分：5-25% 步骤（2）所得的固化后的地衣芽孢杆菌菌株FA08、10-25% 步骤（5）所得的固定后的干酪乳杆菌菌株DS31、余量为粉碎细度120-250目的硅藻土或沸石粉或麦饭石；接着将称取好的各组分混合并搅拌均匀，之后进行分装包装即得所述的复合微生物菌剂。

进一步地，所述LB培养基的组分均为：蛋白胨10g， 酵母粉 5g，NaCl 10g，H₂0 1000 mL。