[发明专利]包括脑膜炎球菌fHBP序列的杂交多肽

说明书

本发明专利申请是国际申请号为PCT/IB2010/002260，国际申请日为2010年8月27日，进入中国国家阶段的申请号为“201080047951.4”，发明名称为“包括脑膜炎球菌fHBP序列的杂交多肽”的发明专利申请的分案申请。

本申请要求2009年8月27日提交的美国临时申请号61/237,576的益处，其完整内容通过引用纳入本文用于所有目的。

技术领域

本发明属于免疫领域，具体地说，是针对由诸如脑膜炎奈瑟球菌(N.meningitidis，脑膜炎球菌)的奈瑟球菌(Neisseria)属致病性细菌导致的疾病的免疫。

背景技术

脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)是一种革兰氏阴性包膜细菌病原体。虽然存在针对血清群A、C、W135和Y的多糖和偶联疫苗，但是该方法无法应用于血清群B，因为荚膜多糖是一种多聚唾液酸的聚合物，是人类的一种自身抗原。为了产生针对血清群B的疫苗，使用了外膜囊泡(OMV)。这些疫苗会引起血清杀菌抗体应答和抵抗疾病，但是无法诱导菌株间的交叉保护作用[1]。一些研究者因此着重于用于疫苗的特定脑膜炎球菌抗原[2]。

一种这样的抗原是脑膜炎球菌H因子结合蛋白(fHBP)，也称作‘741’蛋白[参考文献3中的SEQ ID 2535 & 2536；本文的SEQ ID 1],‘NMB1870’,‘GNA1870’[参考文献4-6，在参考文献2之后],‘P2086’,‘LP2086’或‘ORF2086’[7-9]。该脂蛋白在全部脑膜炎球菌血清群中都表达，在许多菌株中都有发现。fHBP序列被分成三个家族[4](本文称作家族I,II & III),对一特定家族产生的血清在同一家族中具有杀菌性，但对表达其它家族之一的菌株无活性，即存在家族内，而非家族间的交叉保护。

因此，为了实现使用fHBP的交叉菌株保护，使用了多于一种家族。为了避免表达和纯化独立蛋白的需要，已提出将不同家族表达成杂合蛋白[10-12]，在一条多肽链中包括两或三个家族。文献13和14描述了基于诱变的修饰fHBP序列，以提高其对家族I、II和III的覆盖的方法。文献15描述了经修饰提高其家族间覆盖的fHBP的各种其它形式。

本发明的一个目的是提供fHBP具有的家族特异性保护的进一步和改良的方法，和使用这些方法提供针对脑膜炎球菌病和/或感染，特别是针对B血清群的免疫。

发明内容

全长fHBP在菌株MC58中具有以下氨基酸序列(SEQ ID NO:1)：MNRTAFCCLSLTTALILTACSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ

成熟的脂蛋白缺乏SEQ ID NO:1的前19个氨基酸，fHBP的ΔG形式缺少前26个氨基酸。

MC58序列(SEQ ID NO:1)属于fHBP家族I。用MC58序列引发的抗体具有针对MC58菌株的高度杀菌活性，但是对于表达家族II或III fHBP的菌株的活性低得多。在一些实施方式中，本发明涉及修饰形式的fHBP，其中修饰作用改善了该蛋白引发家族间杀菌抗体的能力。在其他实施方式中本发明涉及融合蛋白，其中fHBP的改良形式与第二氨基酸序列，例如另一种脑膜炎球菌免疫原或另一种fHBP(包括修饰的fHBP)融合。

因此，本发明提供了一种多肽，其含有氨基酸序列SEQ ID NO:77或SEQ ID NO:78。这些氨基酸序列从MC58序列与Val-27匹配的残基开始，但包括下游位点的各种氨基酸修饰。