[发明专利]一种白木香叶HPLC指纹图谱的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药材质量控制技术领域，具体涉及一种白木香叶HPLC指纹图谱的建立方法。

背景技术

利用色谱指纹图谱获取全面的中药化学成分特征信息已广泛地应用于中药的质量控制之中，中药色谱指纹图谱是对中药整体性的化学特征的表达和反映。目前，美国食品药品管理局(FDA)、英国草药典、德国药用植物学会、印度草药典、加拿大药用植物学会均接受和收载指纹图谱的质量控制方法，目前指纹图谱已成为国际公认的控制中成药、天然药物质量的最有效的方法。中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，因此高效液相色谱法已成为中药指纹图谱技术的首选方法。

白木香习称土沉香，主产于印度、马来西亚等国东南亚国家。盛产于我国岭南地区，是我国历史悠久的名贵中药材，也是重要的“南药”资源，位列“十大南药”之一，其药用部位来源为瑞香科植物白木香[Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.]含树脂的心材部分。现代临床常用于消化系统、神经系统以及心血管系统为主的多种疾病的治疗，具有良好的效果。各版《中国药典》对白木香均有收载，并且自2010版药典开始，白木香被规定为沉香药材唯一的法定植物来源。

目前白木香资源的开发利用仅限于其药用部位(含树脂心材)的研究，而白木香叶作为该植物最为丰富的资源部位,其药理研究却仅处于起步阶段。白木香叶口服给药具有显著的抗炎镇痛药理活性。通过建立白木香叶HPLC指纹图谱，可对白木香叶正丁醇部位各化学成分进行监控。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，为了更好的控制中药材白木香叶的质量，提供一种白木香叶HPLC指纹图谱的建立方法。

本发明所要解决的上述技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种白木香叶HPLC指纹图谱的建立方法，包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、指纹图谱的色谱条件的确定、标准指纹图谱的确定，所述的指纹图谱的色谱条件为：采用C₁₈色谱柱；以乙腈-0.1～0.5％磷酸缓冲盐溶液为流动相进行梯度洗脱；使用紫外检测器进行检测，检测波长为300～360nm；

所述的梯度洗脱条件为：0min时，乙腈的体积分数为10％，磷酸缓冲盐溶液的体积分数为90％；15min时，乙腈的体积分数为15％，磷酸缓冲盐溶液的体积分数为85％；25min时，乙腈的体积分数为15％，磷酸缓冲盐溶液的体积分数为85％；27min时，乙腈的体积分数为20％，磷酸缓冲盐溶液的体积分数为80％；40min时，乙腈的体积分数为25％，磷酸缓冲盐溶液的体积分数为75％；55min时，乙腈的体积分数为32％，磷酸缓冲盐溶液的体积分数为68％。

为了使各个峰能够尽可能的分开，达到最佳的分离效果，本发明通过大量实验反复多次对流动相比例进行调整，最终确定上述梯度洗脱条件。

作为一种优选方案，所述的C₁₈色谱柱为kromasil-C₁₈色谱柱。规格为4.6mm×250mm，5μm。

本发明分别考察了多条色谱柱，其中kromasil-C₁₈(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱、Agilent-C₁₈(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱、Thermo-C₁₈(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱对分离效果较好，结果显示(见附图1)，kromasil-C₁₈色谱柱对目标峰分离效果最好。

作为一种优选方案，所述的磷酸缓冲盐溶液质量浓度为0.3％磷酸缓冲盐溶液。

采用磷酸缓冲盐或高浓度的甲酸缓冲盐可明显改善白木香叶中各成分的分离洗脱效果。但由于过高的酸度容易使缓冲盐结晶析出，造成色谱柱的堵塞，从而影响实验进程以及色谱柱寿命，故本发明在多个缓冲盐浓度的条件下，考察缓冲盐浓度对各成分分离效果的影响，确定最佳缓冲盐比例。结果见附图2。结果显示，浓度在0.3％以上的磷酸缓冲盐能够改善分离效果，由于继续增加酸度可能影响色谱柱寿命，故本实验选择0.3％磷酸缓冲盐作为水系流动相。

作为一种优选方案，所述的检测波长为340nm。

根据实际情况综合考虑各色谱峰的最大吸收波长，选定出峰数较多，并且响应值较为均衡的波长作为最佳测定波长，并在该波长下标记13个响应值较大的峰作为特征峰，并将对照品峰进行标识。结果见附图3。综合各方面因素，最终选择340nm波长作为测定波长。

作为一种优选方案，柱温为25℃，流速为0.8ml/min，进样量10μl。