[发明专利]一种埃博拉病毒分型荧光PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明提供一种埃博拉病毒分型荧光PCR检测试剂盒。

背景技术

埃博拉病毒(EBOV)属丝状病毒科(Filiviridae)，为不分节段的单股负链RNA病毒。病毒呈长丝状体，可呈杆状、丝状、“L”形等多种形态。毒粒长度平均1000nm，直径70-90nm。病毒有脂质包膜，包膜上有呈刷状排列的突起，主要由病毒糖蛋白组成。埃博拉病毒基因组是不分节段的负链RNA，大小为18.9kb，编码7个结构蛋白和1个非结构蛋白。

EBOV可在人、猴、豚鼠等哺乳类动物细胞中增殖，其中Vero-98、Vero-E6、Hela-229细胞最敏感。病毒接种后，6-7小时出现细胞病变，表现为细胞圆化、皱缩，细胞质内可见纤维状或颗粒状结构的包含体。给猕猴接种埃博拉病毒后可产生与人类疾病相似的症状体征并引起死亡。在鸟类、爬行类、节肢动物和两栖类动物细胞内不能复制，在仓鼠与豚鼠中，需多次传代才能引起死亡。

埃博拉病毒包括五种亚型：扎伊尔型、苏丹型、本迪布焦型、塔伊森林型、莱斯顿型。前四种亚型埃博拉病毒已证实能够致人类疾病。不同亚型毒力不同，扎伊尔型毒力强，人感染后病死率高，苏丹型次之，本迪布焦型更次，塔伊森林型对黑猩猩有致死性，但对人的毒力较弱。莱斯顿型对非人灵长类动物有致死性，而人感染后不发病。不同亚型病毒糖蛋白的基因组核苷酸构成差异较大(同源性为34％-43％)，但同一亚型的病毒基因组相对稳定，遗传特性很少发生变化。

埃博拉出血热(Ebola feve)是由埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)引起的一种急性出血性传染病。主要通过接触病人或感染动物的血液、体液、分泌物和排泄物等而感染，临床表现主要为突起发热、出血和多脏器损害。埃博拉出血热病死率高，可达50％-90％。本病于1976年在非洲首次发现，主要在乌干达、刚果、加蓬、苏丹、科特迪瓦、南非、几内亚、利比里亚、塞拉利昂、尼日利亚等非洲国家流行。

接触传播是本病最主要的传播途径。病人或动物的血液及其他体液、呕吐物、分泌物、排泄物(如尿、粪便)等均具有高度的传染性，可以通过接触病人和亚临床感染者(特别是血液、排泄物及其他污染物)而感染。病人自急性期至死亡前血液中均可维持很高的病毒含量，医护人员在治疗、护理病人时、或处理病人尸体过程中容易受到感染，病人的转诊还可造成医院之间的传播。医院内传播是导致埃博拉出血热暴发流行的重要因素。此外，吸入感染性的分泌物、排泄物、未经消毒的注射器等也可造成感染。

本病潜伏期为2-21天，一般为5-12天。感染埃博拉病毒后可不发病或呈轻型，非重病患者发病后2周逐渐恢复。典型病例为急性起病，临床表现为高热、畏寒、头痛、肌痛、恶心、结膜充血及相对缓脉。发病2-3天后可有恶心、呕吐、腹痛、腹泻、粘液便或血便等表现，半数病人可有咽痛及咳嗽。病后4-5天进入极期，发热持续并出现神志的改变，如谵妄、嗜睡等。重症病人在发病数日可出现不同程度的出血倾向，有咯血，鼻、口腔、结膜、胃肠道、阴道及皮肤出血或血尿，病后第10日为出血高峰，50％以上的患者出现严重的出血，并可因出血、肝肾功能衰竭及致死性并发症而死亡。病人最显著的表现为低血压、休克和面部水肿，还可出现DIC、电解质和酸碱的平衡失调等。90％的死亡患者在发病后12天内死亡(7-14天)。急性期并发症有心肌炎、细菌性肺炎等。由于病毒持续存在于精液中，也可引起睾丸炎、睾丸萎缩等迟发症。在病程第5-7日可出现麻疹样皮疹，以肩部、手心和脚掌多见，数天后消退并脱屑，部分患者可较长期地留有皮肤的改变。目前对埃博拉出血热尚缺乏特效治疗方法，主要是对症和支持治疗。

临床早期诊断埃博拉出血热相当困难，因其症状无特殊性，不易与其他病毒性出血热如拉沙热、黄热病、马尔堡出血热、克里米亚－刚果出血热、肾综合征出血热等鉴别。可以参考这些疾病的流行病学特点，主要是流行地区、流行季节等进行鉴别。确诊主要依靠实验室检测，具体方法如下：

(一)血清学检测

患者最早可在症状出现后7-10天从血清中检出特异性IgM、IgG抗体，IgM抗体可维持3个月，IgG抗体可维持很长时间。多数患者抗体出现于起病后10-14天，也有重症病人至死也未能检出抗体，故IgG抗体检测主要用于血清流行病学调查，IgM抗体可作为近期感染的血清流行病学调查指标，但不能满足早期诊断的需要。血清特异性IgM抗体多采用IgM捕捉ELISA法检测；血清特异性IgG抗体多采用ELISA、免疫荧光等方法检测。

(二)病原学检测