[发明专利]一种基于SSR标记的京红3号萝卜杂交种纯度鉴定的方法

权利要求书

1.一种用于京红3号萝卜杂交种纯度鉴定的引物序列，其特征在于，所述引物核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1～2所示。

2.利用权利要求1中所述引物检测京红3号萝卜杂交种纯度的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)快速提取京红3号萝卜杂交种基因组DNA：种子发芽72小时后，取下胚轴置于2.0mL离心管中；加入0.4mol·L^-1NaOH溶液100μl，钢珠2个；在48孔研磨器上研磨1min；轻甩离心后，放于沸水中温浴1min；10000rmp离心1min；取上清液10μl放入96孔PCR板中，加200μl pH＝8.0的Tris缓冲液，混匀备用；

(2)采用如序列表SEQ ID No.1～2所示引物进行PCR扩增：反应体系为：1μl含Mg²⁺的10×Buffer，0.8μl 2.5mM dNTP，1U Taq DNA聚合酶，10μM SSR上下游引物各加0.5μl，模板DNA 2μl，ddH₂O补足至10μl；PCR反应程序为94℃预变性5min；35个扩增循环，94℃30sec，60℃30sec，72℃1min；72℃延伸7min，4℃保存；

(3)将步骤(2)的扩增产物经10％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，银染法染色，照相并统计结果，比较京红3号杂交种及其双亲的特征谱带，表现共显性互补带型的为京红3号杂交种，只有亲本之一带型的为非杂交种，出现其他第三种带型的为外来杂种；

(4)利用步骤(3)的统计结果计算供试京红3号萝卜杂交种纯度：送检测京红3号杂交种纯度％＝(总检测种子粒数-非杂交种数-外来杂种数)/总检测种子粒数×100％。