[发明专利]一种猪脂肪组织无细胞基质材料的制备方法有效
申请号: | 201510014130.5 | 申请日: | 2015-01-12 |
公开(公告)号: | CN104548207B | 公开(公告)日: | 2017-11-07 |
发明(设计)人: | 吕青;谭秋雯;张迪;熊炳钧;范雪娇;杨志明 | 申请(专利权)人: | 四川大学华西医院 |
主分类号: | A61L27/36 | 分类号: | A61L27/36;A61L27/56 |
代理公司: | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)51222 | 代理人: | 李高峡,张娟 |
地址: | 610041 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 种猪 脂肪 组织 细胞 基质 材料 制备 方法 | ||
1.一种制备猪脂肪组织无细胞基质材料的方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)取新鲜猪皮下脂肪,清洗,剪碎,加水或者生理盐水,匀浆,离心,得沉淀,用PBS溶液或水漂洗;
(2)将沉淀粉碎,用SDS溶液漂洗,再用PBS溶液或水漂洗,离心,得沉淀;
(3)将沉淀用异丙醇溶液或者异丙醇漂洗,再用PBS溶液或水漂洗,即可;
步骤(1)中,所述匀浆的转速为10000~15000rpm,时间为3~7min;
步骤(1)中,所述离心的转速为3000~4000rpm,时间为3~7min;
步骤(2)中,所述粉碎是球磨粉碎,球磨粉碎的转速为2000~3000r/s,时间为3~7min;
步骤(2)中,所述SDS溶液的浓度为0.25%~1%w/v;
步骤(2)中,所述SDS溶液漂洗的时间为2~6h;
步骤(3)中,所述异丙醇溶液的浓度大于等于80%,小于100%;
步骤(3)中,所述异丙醇溶液或者异丙醇的漂洗时间为1~3h。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,剪碎至大小为(0.5~1.5)cm×(0.5~1.5)cm×(0.5~1.5)cm。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:剪碎至大小为1cm×1cm×1cm。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,匀浆前,所述水或生理盐水的用量为皮下脂肪体积的0.5~2倍。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述水或生理盐水的用量为皮下脂肪体积的1倍。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述匀浆的转速为12000rpm,时间为5min。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述离心的转速为3500rpm,时间为5min。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述球磨粉碎的转速为2500r/s,时间为5min。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述SDS溶液的浓度为0.5%w/v。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述SDS溶液漂洗的时间为4h。
11.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:沉淀用异丙醇漂洗。
12.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述异丙醇溶液或者异丙醇的漂洗时间为2h。
13.权利要求1~12任意一项方法制备得到的猪脂肪组织无细胞基质材料。
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