[发明专利]一种在聚乙烯微孔板上包被核酸的方法在审
| 申请号： | 201510015018.3 | 申请日： | 2015-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN104569383A | 公开（公告）日： | 2015-04-29 |
| 发明（设计）人： | 张鹭鹭;李先坤;程昀静;李小磊 | 申请（专利权）人： | 科蒂亚（新乡）生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/545 | 分类号： | G01N33/545 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 453400 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 聚乙烯 微孔 包被 核酸 方法 | ||
1.一种在聚乙烯微孔板上包被核酸的方法，其特征在于，包括步骤：
(1)核酸活化；
(2)核酸探针包被聚乙烯微孔板；
(i)1X PBS洗聚乙烯微孔板，洗板后加入Phe Lys solution溶液180～220μL，25～35℃，孵育15h～17h；
(j)甩出聚乙烯微孔板中Poly Phe Lys液体，1X PBS洗板；
(k)加入稀释的核酸溶液，2℃-8℃孵育15h～17h；
(o)拍出聚乙烯微孔板中液体，1X PBS洗板；
(p)加入膜再生液200～300μL，室温孵育1h-2h；
(q)拍出聚乙烯微孔板中液体，1X PBS洗板；
(r)加入偶联剂80～120μL，2℃-8℃孵育15h-17h；
(s)拍出聚乙烯微孔板中液体，1X PBS洗板。
2.根据权利要求1所述的聚乙烯微孔板上包被核酸的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：(a)解冻BS3；
(b)平衡PD-10柱子；
(c)计算活化核酸体积；
(d)在所述核酸中添加磷酸盐缓冲液；
(e)在添加了磷酸盐缓冲液核酸溶液中添加所述步骤a中解冻的BS3，室温摇匀25～35min；
(f)将步骤(e)中反应液加载到PD-10柱子，用洗脱液洗脱，收集洗脱下的洗脱成分；
(g)将所述洗脱成分进行OD260验证；
(h)含有95％核酸的洗脱成分合并起来，取9.5nmoleBS3活化并纯化的核酸加入到包被液中稀释。
3.根据权利要求2所述的聚乙烯微孔板上包被核酸的方法，其特征在于，所述步骤h取9.5nmoleBS3活化并纯化的核酸加入到包被液中稀释的浓度：95nmole/L。
4.根据权利要求1所述的聚乙烯微孔板上包被核酸的方法，其特征在于，包括步骤：所述步骤(2)还包括：(t)使用1X PBS洗板洗板后，将聚乙烯微孔板在温度22℃±3℃、湿度≤15％环境下干燥2h-3h。
5.根据权利要求1～4所述的聚乙烯微孔板上包被核酸的方法，其特征在于，所述膜再生液为：ddH2O：280mL、氢氧化钠:2.25g、SDS:0.28g、混合摇匀15-60min制成。
6.根据权利要求1～4所述的聚乙烯微孔板上包被核酸的方法，其特征在于，根据权利要求1～4所述的聚乙烯微孔板上包被核酸的方法，其特征在于，所述偶联剂为：1M NaH2PO4:0.918mL和1M Na2HPO4:9.882mL用ddH2O调节体积至120mL并混匀；使用前加入BS3，混匀5min后使用。
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