[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌及选育方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种苏云金芽孢杆菌及选育方法，及其在制备生物农药领域中的应用。

背景技术

软腐病俗称“半边疯”，是魔芋生产上危害最严重的病害。魔芋软腐病属软腐欧文氏菌属(Erwinia)，是一种革兰氏阴性细菌，胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜软腐亚种(Erwinia carotovora subsp.carotovora)，栽培期及贮藏期可发病，影响产量和品质。魔芋种植业每年因软腐病损失巨大。

几个世纪以来，化学农药在植物病虫害的防治中发挥了巨大作用，为农业的增产、稳产和提高品质做出了重要贡献。但是由于过量施用和滥用农药导致地力衰退和环境污染。尤其近几年来由于农药残留超标，严重影响了人们的生活质量。在当前农作物无公害栽培中，微生物农药越来越受到重视。因为它们不仅防治病虫害的效果好，而且对环境友好、对农作物无污染，病虫对其不易产生抗药性。因此，在生物农药中，以微生物农药用途多、应用前景最为广阔。

芽孢杆菌属的细菌为好氧或兼性厌氧的杆菌，广泛分布在水、空气和土壤中。芽孢杆菌在孢子状态下稳定性好，能耐氧化；耐挤压；耐高温，能长期耐60℃高温，在120℃温度下能存活20分钟；耐酸碱，在酸性胃环境中能保持活性，可以耐唾液和胆汁的攻击，是饲料微生物中可100％直达大小肠的活菌。同时本品具有安全高效，无药残，无毒副作用，能减少抗生素药物的使用，增强免疫力的优点，因而在生物防止病虫害中起着重要作用。目前芽孢杆菌属用于防止病虫害主要有：枯草芽孢杆菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种苏云金芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ML1，该苏云金芽孢杆菌对魔芋软腐病原有很好的抑制作用，为开发新的生物农药品种、植物生物防治菌剂提供了新选择。

所述苏云金芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ML1是从疏花水柏枝(MyricariaLaxiflora)的叶中获得的内生细菌，于2014年5月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为，CCTCC NO：M2014181。保藏地址为中国，武汉，武汉大学。

本发明苏云金芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ML1在牛肉膏蛋白胨培养基上具有以下微生物学特性：米白色，表面较干燥，单菌落较小且呈圆形，革兰氏阳性，具有芽孢。

本发明还提供苏云金芽孢杆菌的选育方法，包括如下步骤：

1)取疏花水柏枝叶，加入无菌水中，研磨捣碎得组织液，吸取组织液加入无菌水中，再用无菌水稀释组织液浓度至10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7共7个浓度梯度；

2)取上述各浓度梯度稀释液100μL分别涂布于培养基平板中，倒置恒温箱内30℃培养；

3)待上述平板上长出菌落后，挑取单菌落于灭菌的培养基中，恒温30℃振荡培养24小时，得到细菌培养液；

4)在灭菌的菌种管中，加入1.0mL细菌培养液，0.5ml 50％的甘油，混匀后于-86℃冰箱保存；5)取-86℃冰箱保存的苏云金芽孢杆菌菌株菌种划线接种于斜面培养基中，30℃下，培养12小时；

6)将上述菌体划线接种于培养基中，30℃下，培养18小时，获得苏云金芽孢杆菌体。

所述的培养基是将牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、无菌水以质量比为2：2：1：4：11混合后，在121℃灭菌20min后制得。

将上述苏云金芽孢杆菌，或以苏云金芽孢杆菌为活性成分制得的菌剂应用于制备生物防治植物病害的菌剂。

或，将上述苏云金芽孢杆菌菌株，或以苏云金芽孢杆菌菌株为活性成分所制得的菌剂应用于制备生物防治植物病害的菌剂。

或，将上述云金芽孢杆菌菌株的微生物菌剂，或以苏云金芽孢杆菌菌株的微生物菌剂为活性成分制得的菌剂应用于制备生物防治植物病害的菌剂。

另，将上述苏云金芽孢杆菌或以苏云金芽孢杆菌为活性成分应用于制备生物农药或以苏云金芽孢杆菌为组分或活性成分应用于制备生物农药组合物。

或，将上述苏云金芽孢杆菌菌株的发酵液或悬乳液，或以苏云金芽孢杆菌菌株的发酵液或菌悬液为活性成分应用于制备生物农药；或以苏云金芽孢杆菌菌株的发酵液或菌悬液为组分或活性成分应用于制备生物农药组合物。