[发明专利]一种变温转染技术

权利要求书

1.一种变温转染技术，其特征在于所述技术包括如下步骤：

1)利用培养液培养细胞；

2)收集目的细胞：

2.1)吸掉所述步骤1)中培养液的上清；

2.2)用3ml PBS清洗两次；

2.3)加入0.25％胰酶，使大部分细胞脱落悬浮起来；

2.4)加入含血清的培养液，中和胰酶，终止消化，得到细胞悬液；

2.5)对步骤2.4)中所述细胞悬液在常温下，以1000rpm速度离心处理；

2.6)去除离心后得到的细胞悬液上清，得到目的细胞；

3)细胞与DNA物质混匀后进行变温：

3.1)利用20μl DMSO、180ul新鲜培养液配制得到冻存液；

3.2)在所述目的细胞中加入500μl新鲜培养液，再加入所述冻存液，混匀；

3.3)在-80℃条件下，冻存一夜；

3.4)在37℃条件下，解冻；

3.5)无菌条件下，在解冻后得到的液体中，加入新鲜培养液；

3.6)对将步骤3.5)中得到的液体在常温下，以1000rpm速度离心处理；

3.7)利用20ng质粒和1ml培养液配制转染液；

3.8)去掉步骤3.6)中上清，并加入步骤3.7)中所述转染液，混匀；

4)培养：每3天进行一次传代培养。

2.根据权利要求1所述技术，其特征在于所述培养液使用包括但不限于DMEM/F12、FBS、Penicillin-Streptomycin等原料配制，其中Penicillin-Streptomycin，每毫升包含10000单位青霉素(碱)和10000μg链霉素(碱)，利用0.85％盐液形式的青霉素G(钠盐)和硫酸链霉素。

3.根据权利要求1所述技术，其特征在于所述血清包括但不限于优质胎牛血清。