[发明专利]具有延长的体内半寿期的因子IX类似物

说明书

本申请是国际申请日为2007年5月24日、国际申请号为PCT/EP2007/055031、进入国家阶段的申请号为200780019090.7、发明名称为“具有延长的体内半寿期的因子IX类似物”的PCT申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及凝血因子IX(FIX)类似物及衍生物，与天然的因子IX相比，它们在血流中的循环时间延长。

背景技术

因子IXa(FIXa)是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，在止血过程中发挥重要作用，它是凝血因子X酶复合物的组成部分，产生大部分的因子Xa，因子Xa在凝血过程中参与凝血酶的形成(见综述(Hoffman和Monroe，III 2001))。先天性因子IXa缺乏导致X-连锁出血性疾病-血友病B，男性发病率约为1∶100,000。目前，血友病B的治疗主要是使用重组或血浆凝血因子IX的替代疗法。然而，目前的观点正由传统的按需治疗转变为预防性治疗。当前的预防性治疗需要每周多次给药，但要达到最佳的血浆浓度和药效，最好每天注射一次。但考虑到每天给药的实用性和经济限制，目前尚不能用于患者的治疗。因而，显然需要一种长效的重组因子IX药物。

WO 2006005058涉及因子IX的一部分与一种或多种分子量为5-150kDa的水溶性聚合物的结合体。WO 2006018204涉及修饰的维生素K依赖性多肽，包括修饰的激活肽。WO 2004101740涉及嵌合蛋白，至少包括一种凝血因子和部分免疫球蛋白恒定区。WO 2005001025涉及嵌合单体-二聚体杂交蛋白，其中该蛋白的第一条多肽链包括部分免疫球蛋白恒定区和生物活性分子，第二条多肽链包括不含生物活性分子的部分免疫球蛋白恒定区。US 2006040856涉及因子IX和聚乙二醇的结合，聚乙二醇通过完整的糖基连接起来并连接到多肽和修饰基上。

SE 9501285A公开了使用一种混合物在体外合成具有适当折叠和二硫化物交联的生物活性蛋白的方法，该混合物包括蛋白二硫化物氧化还原酶(如蛋白二硫化物异构酶(PDI))，谷氧还蛋白和氧化还原体系。参考文献主要是关于参与分子内二硫键形成的半胱氨酸残基。

WO 2006/134173涉及至少包含一个非天然半胱氨酸残基的重组工程化蛋白的选择性还原和衍生方法，重组蛋白包括因子IX多肽在内。

本发明的目的是提供修饰的FIX类似物或衍生物，与天然FIX相比，它们在血流中的循环时间延长，但仍能维持足够的生物活性参与凝血。

发明内容

一方面，本发明涉及循环半寿期延长的FIX类似物，其中在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合(conjugate)化学基团的半胱氨酸残基残基取代，所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加，所述位点为第44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80、84、87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141、142、146-180、185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415位。

在优选实施方案中，FIX类似物在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代，所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加，所述位点为第44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80或84位。

在另一优选实施方案中，FIX类似物在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代，所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加，所述位点为第87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141或142位。