[发明专利]一种融合多肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种融合多肽，同时还涉及该融合多肽的制备方法和应用。

背景技术

棉铃虫，夜蛾科铃夜蛾属昆虫的一种，是棉花蕾铃期的大害虫，广泛分布在世界各地，中国棉区和蔬菜种植区均有发生，主要蛀食蕾、花、铃和嫩叶。棉铃虫天敌很多，有寄生性天敌—寄生蜂、寄生蝇等，捕食性天敌乌雀类及一些细菌、真菌、病毒等可对棉铃虫的卵和幼虫起到抑制作用。

利尿激肽helicokinin I(HKI)对棉铃虫的水分代谢活动刺激最为强烈(Seinsche et al.，2000)，在极微量的HKI注射进入棉铃虫幼体后，即可使其过度排泄，进而导致死亡，HKI作为杀虫物质进行应用的潜力巨大。由于其来源于生物体，对高等生物和环境安全，因此作为杀虫物质进行应用具有先天的环境优势。如何将HKI作为一种杀虫活性物质进行使用，是否可以利用害虫的取食行为将其摄入体内发挥作用；如何使有活性的短肽分子穿透消化道进入体内位点，同时保证短肽在运送过程中的稳定，这是亟待解决的问题。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的之一在于提供一种对棉铃虫具有强的毒杀活性的融合多肽。

本发明的目的之二在于提供一种融合多肽的制备方法。

同时，本发明还在于提供一种融合多肽的应用。

为了克服现有技术的缺陷，本发明采用的技术方案如下：

一种融合多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。具体为：甲硫氨酸-酪氨酸-甘氨酸-精氨酸-赖氨酸-赖氨酸-精氨酸-精氨酸-谷氨酰胺-精氨酸-精氨酸-精氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-酪氨酸-苯丙氨酸-丝氨酸-脯氨酸-色氨酸-甘氨酸。

所述融合多肽的N端乙酰化。

上述融合多肽的制备方法，包括以下操作步骤：

1)以2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯为缩合剂，以聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂为起始树脂，采用FMOC固相合成法逐一耦合每一个保护氨基酸，合成得到全保护的肽链树脂；

2)制备的融合多肽N端进行乙酰化。

3)用切割试剂对乙酰化处理后的测链全保护的肽链树脂进行切割，将肽链从树脂上裂解下来并取出侧链保护基团，得到多肽粗品；

4)将步骤3)制备的多肽粗品经冰乙醚沉淀，离心收集沉淀，分离纯化，冷冻干燥即得所述的融合多肽。

步骤2)所述乙酰化试剂为乙酸酐和N-甲基咪唑的混合液。

步骤3)中切割试剂为氟化氢、对甲苯酚、对疏基苯酚按照体积比90：5：5的比例配制而成的混合物。

步骤3)中切割试剂的用量为10～15mL/g。

上述融合多肽在制备防治棉铃虫药物方面的应用。

TAT(transactivator of transcription，TAT)为病毒有效转录和复制所必须的多肽序列。TAT能够将与之共价连接的生物大分子非特异地转导细胞内部，这种过程既不依赖于受体和转运蛋白，也与温度和能量无关，而且对宿主细胞几乎没有毒性。这种具有携带外源蛋白穿透细胞膜能力的特异多肽序列称为蛋白转导域(Protein transduction Domains，PTDs)，也称细胞穿膜肽(cell penetratingpeptides，CPP)。