[发明专利]转基因大豆MON89788及其衍生品种的LAMP检测引物组、检测试剂盒和检测方法

权利要求书

1.转基因大豆MON89788及其衍生品种的LAMP检测引物组，其特征在于，包括外引物1和外引物2、内引物1和内引物2，其核苷酸序列分别如下所示：

外引物1：TTCCTGCTCCACTCTTCC（SEQ ID No：1）；

外引物2：GCTAATGGTTTGGAGACTCTG（SEQ ID No：2）；

内引物1：AGAGCTTGATGGGGATCAGATTGTCGCTTCAATCGTGGTTATCA（SEQ ID No：3）；

内引物2：GTTATCAAGCTTCTGCAGGTCCTGTACCCTGACCTTGTTGAGG（SEQ ID No：4）。

2.转基因大豆MON89788及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分：

（1）引物液：含有权利要求1所述的引物组，浓度分别为48～52μM外引物1、48～52μM外引物2，48～52μM内引物1、48～52μM内引物2；

（2）反应液：含有12mM dNTP、10×Isothermal Amplification反应缓冲液、150mM MgSO₄水溶液，三者的体积比是7～9：4～6：2；

（3）DNA聚合酶：浓度为7～9U/μl；

（4）对照：阳性对照为转基因大豆MON89788的DNA或含目的基因的大肠杆菌质粒DNA，阴性对照为不含目的基因的反应混合液。

3.根据权利要求2所述的转基因大豆MON89788及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述引物液中含有50μM外引物1、50μM外引物2，50μM内引物1、50μM内引物2。

4.根据权利要求2所述的转基因大豆MON89788及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶，浓度为8U/μl。

5.根据权利要求2所述的转基因大豆MON89788及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述反应液中，12mM dNTP：10×Isothermal Amplification反应缓冲液：150mMMgSO4的体积比为8：5：2。

6.利用权利要求2～5任一所述的转基因大豆MON89788及其衍生品种的LAMP检测试剂盒检测转基因大豆MON89788及其衍生品种的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）待检样品DNA的提取：采用CTAB法提取纯化样品DNA；

2）恒温检测反应：在PCR管中配制反应体系：引物液1.8μl，反应液15.2μl，DNA聚合酶1μl，待检DNA 1～6μl，用DNase/RNase-Free Distilled Water补齐到25μl；设置阳性对照反应时，用转基因大豆MON89788的DNA或含目的基因的大肠杆菌质粒DNA替代待检DNA，设置阴性对照反应时，用不含目的基因的反应混合液替代待检DNA；将配制好的PCR管混匀后离心，并于60～65℃反应45～90min，并在80℃持续2min；

3）结果判断：通过观察PCR管内沉淀的浊度变化来判断扩增结果。

7.根据权利要求2～5任一所述的转基因大豆MON89788及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于，还含有显色剂，所述显色剂为荧光染料Calcein。