[发明专利]杂交瘤细胞DBP-4E10及其产生的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体

说明书

本发明提供了杂交瘤细胞株4E10、其分泌产生的抗邻苯二甲酸二丁酯DBP单克隆抗体及其应用。该杂交瘤细胞株4E10可以用于制备高效价邻苯二甲酸二丁酯DBP抗体，鼠腹水抗体酶联免疫吸附分析(ELISA)法测得的效价可达3.12×10⁶；该抗邻苯二甲酸二丁酯DBP单克隆抗体灵敏度高，对邻苯二甲酸二丁酯DBP的50％抑制浓度即IC50为0.22 mg/mL，其用于测定邻苯二甲酸二丁酯DBP含量，实际应用价值大。

技术领域

本发明涉及杂交瘤细胞株DBP‐4E10及其产生的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体。

背景技术

邻苯二甲酸酯类化合物(PAEs)是一类环境激素类物质，具有雌激素活性，干扰生物体内分泌系统正常功能、导致突变、畸变和癌细胞增殖。2005年，欧盟将邻苯二甲酸二辛酯(DEHP),邻苯二甲酸二丁酯(DBP)及邻苯二甲酸丁苄酯(BBP)评定为“第二类生殖毒性”。其中，DBP被认为是毒性最高的酞酸酯类化合物。

PAEs化合物是塑料工业的主要增塑剂和软化剂，广泛应用于食品包装材料、容器、医疗用品及塑料等的制造。由于其广泛应用以及从各种制品中的释放，酞酸酯类化合物已经几乎渗透到我们生活的每一个角落。研究表明，我国居民DBP每日摄入量为12.2mg/kg，超过世界卫生组织建议的10mg/kg.d的每日最大容许摄入量标准。食品被认为是人类暴露于酞酸酯类化合物的主要途径。食品中酞酸酯类化合物的污染主要来自于食品的塑料包装以及生产过程。这是因为酞酸酯是一种脂溶性化合物，它很容易进入食品的脂肪、油脂中，并在其中富集。

DBP现有的检测方法GC、MS、HPLC测定DBP灵敏度高、精确度好，而且能分别测定结构相似的多种化合物及其异构体，是目前最理想的检测方法。但是这类分析方法体系将待测污染物从样品中分离提取并去除杂质干扰的前处理过程十分复杂，操作费时，分析成本昂贵。所以开发操作简单、快速、经济且灵敏度高的检测方法具有重要的实际意义。

免疫分析方法将免疫反应的高特异性和现代测试手段高灵敏性相结合，具有快速、经济、样品所需量少、前处理简单等优点，成为现代生物化学、医学、化学分析和环境监测等领域的研究热点。免疫分析是利用抗原抗体的特异性的结合反应和抗原、抗体上的标记物的放大作用来对超微量待测物进行定性、定量检测，所以要研究建立针对邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的任何一种免疫学检测技术，都必须先获得抗邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的抗体。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供杂交瘤细胞株DBP‐4E10及其产生的邻苯二甲酸二丁酯DBP的单克隆抗体

本发明提供了杂交瘤细株DBP‐4E10，该细胞株已于2014年12月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是，中国，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.10202。分类命名为S/P20杂交瘤细胞。

抗邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.10202的杂交瘤细胞株DBP‐4E10分泌产生。该DBP单克隆抗体可以识别邻苯二甲酸二丁酯，对邻苯二甲酸二丁酯的50％抑制浓度IC50为0.22mg/L。

抗邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体在邻苯二甲酸二丁酯测定中的应用。