[发明专利]一种酶法高效合成苄氧羰基阿斯巴甜的工艺

权利要求书

1.一种酶法高效率合成苄氧羰基阿斯巴甜的工艺，其特征在于：耐有机溶剂蛋白酶WQ9-2或其突变体催化苄氧羰基天冬氨酸和苯丙氨酸甲酯或其盐酸盐酶法合成苄氧羰基阿斯巴甜；所述耐有机溶剂蛋白酶WQ9-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述酶法合成的反应体系中pH值为6；

所述苄氧羰基天冬氨酸和苯丙氨酸甲酯或其盐酸盐的反应体系摩尔比为1:3～1:6；所述耐有机溶剂蛋白酶WQ9-2或其突变体的用量为1000-2000U/mL；

所述酶法合成在有机溶剂和/或水相中进行，所述有机溶剂选自DMSO、乙醇或者甲醇中的一种；当酶法合成在有机溶剂和水相的混合液中进行时，有机溶剂在混合液中的体积浓度(v/v)不大于10％；

所述突变体为突变体WQ9-2-3C、WQ9-2-4F、WQ9-2-7K、WQ9-2-13D、WQ9-2-20C；其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7所示。

2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：酶法合成的反应体系中加入0-10mM的Ca²⁺。

3.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：酶法合成的反应体系中加入5mM的Ca²⁺。

4.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：所述酶法合成的反应温度为20-45℃。

5.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：所述酶法合成的反应温度为30℃。

6.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：产物从反应体系中直接析出；析出后采用抽滤的方法分离产物，并将溶于反应液中过剩的原料用于循环再利用，在母液中再添加摩尔浓度比为1:1的原料，即可实现批次苄氧羰基阿斯巴甜的合成。

7.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：合成后的苄氧羰基阿斯巴甜采用pH9～10的水溶液溶解，然后用稀盐酸调节体系的pH＝5.5～5.0，或者采用pH＝5.5～5.0的水溶液洗涤，进一步纯化生成的产物，真空干燥即得纯度为99％以上的苄氧羰基阿斯巴甜。