[发明专利]检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒，其特征是，包括试剂盒盒体，所述盒内放置包被反应板以及分别包装好的试剂，所述试剂包括标准品、质控品、酶标抗体、浓缩清洗液、显色剂A、显色剂B、终止液，所述酶标抗体为用辣根过氧化物酶交联的鼠抗Cripto-1的单克隆抗体，所述包被反应板用于包被的抗体为兔抗Cripto-1的多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒，其特征是，所述显色剂A为1%四甲基联苯胺,所述显色剂B为过氧化氢。

3.根据权利要求1所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒，其特征是，所述标准品和质控品分别为Cripto-1的冻干粉，纯度为≥95%。

4.根据权利要求1所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒，其特征是，所述终止液为硫酸。

5.根据权利要求1所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒，其特征是，所述浓缩清洗液为磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）包被反应板的制备：

将20-30ug/ml浓度梯度的兔抗Cripto-1的多克隆抗体加入酶标板中，每孔50μl，25°C 2小时后再置4°C过夜, 之后冻干机冻干保持反应板孔中干燥制成包被反应板，4 ℃ 存放备用；

（2）酶标抗体的制备：

取60ul溶于二甲基甲酞氨的长臂生物素, 加人lml单抗Cripto-1, 25°C反应2小时, 经透析后-20°C冻存；

（3）浓缩清洗液的制备：配制0.1M的磷酸盐缓冲液；

（4）显色剂的配制；

（5）终止液的配制：配制2M的H₂SO₄。

7.根据权利要求6所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒的制备方法，其特征是，上述步骤（2）中，所述长臂生物素的浓度为0.01 mol/l，所述单抗Cripto-1的浓度为1mg/ml。

8.根据权利要求6所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒的制备方法，其特征是，上述步骤（3）中，所述磷酸盐缓冲液包括Na₂HPO₄·12H₂O、KH₂PO₄、NaCl、KCl。

9.根据权利要求6所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒的制备方法，其特征是，上述步骤（4）中，显色剂A的配制方法为：将柠檬酸溶解在499ml的超纯水中，加入TMB，充分溶解后，用稀HCl调pH至2.6，加入超纯水，定容到所需体积；显色剂B的配制方法为：将柠檬酸、十二水合碳酸氢钠溶解在499ml的超纯水中，充分溶解后，用稀HCl调pH至5.2，加入超纯水，定容到所需体积。

10.根据权利要求9所述的检测Cripto-1的酶联免疫试剂盒的制备方法，其特征是，使用前将显色剂A 液与显色剂B 液以1∶1体积比混合。