[发明专利]一种能够防治猪蓝耳病的生物活性分子-抗菌肽CecropinD

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域。更具体地，涉及一种能够防治猪蓝耳病的生物活性分子抗菌肽Cecropin D。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome viruse，PRRSV）引起，PRRS主要引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔及各年龄阶段猪特别是仔猪呼吸道症状，特征性病变为间质性肺炎，死亡率极高，是一种高度接触性的全球性的重要传染病。该病最早于1987年在美国爆发，随后蔓延到欧洲，我国于1996年分离到该病毒。目前，根据基因组序列和抗原性差异，将PRRSV分为两种基因型，一种以Lelystad Virus（LV）毒株为代表的欧洲型，另一种以ATCC VR-2332毒株为代表的美洲型。在我国，PRRSV主要以美洲型为主，但据报道也分离到欧洲型毒株。2006年，我国爆发了猪高热病，对养猪业造成严重的经济损失，后来将此毒株定义为高致病型毒株（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome viruse，HP-PRRSV），目前，高致病性猪蓝耳病（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HP-PRRS）是对养猪业损害最大的疾病之一，由于该病毒具有免疫抑制性、抗体依赖增强性、持续性感染、病毒血症维持时间长等特点，目前没有很好的疫苗和药物可以防控蓝耳病。

PRRSV属于尼多病毒目（Nidovirales）、动脉炎病毒科（Arteriviridae）、动脉炎病毒属（Arterivirus）成员，电镜下观察病毒粒子呈球形或椭圆形，有囊膜。病毒基因组为一条单股正链RNA，全长约为15Kb，含有5′和3′非编码区，中间为10个开放阅读框（open reading frame，ORF），其中ORF2-7分别翻译病毒糖蛋白（glycoprotein GP）GP2a、GP2b、GP3、GP4、GP5、GP5a、M及N蛋白。其中最重要的是GP5和N蛋白，它们不仅是病毒粒子的主要组成部分，而且在病毒粒子的包装、成熟、免疫逃避及抗体诱导中产生重要的作用。

PRRS的防控是目前我国乃至世界的难题。PRRS难于防控主要表现在以下几方面：（1）嗜巨噬细胞性和免疫抑制性疾病，PRRSV主要感染猪的肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages，PAMs），PAMs是免疫细胞，破坏PAMs，从而破坏机体免疫系统，从而引起免疫抑制；（2）抗原变异性，目前PRRSV变异较快，弱毒疫苗的使用是促使病毒变异的一个原因，疫苗没有交叉保护力；（3）抗体依赖性增强，PRRSV的感染会刺激机体产生抗体，但低效价的抗体不但不能中和病毒，反而对病毒的增殖有促进作用；（4）病毒持续性感染，PRRSV感染后，能够长时间在猪体内检测到病毒血症；（5）混合感染，目前临床上混合感染，特别是圆环病毒、副猪嗜血杆菌等与PRRSV的混合感染，使PRRSV防控难上加难。

目前PRRS防控主要有灭活疫苗和弱毒疫苗，临床上用的较多的是弱毒疫苗。其中灭活疫苗有如下缺点：（1）需要大剂量接种或应用浓缩抗原，免疫期短，常需强化接种；（2）不能引起局部免疫，以致细胞免疫的作用弱；（3）产生完全免疫力需要2～3周，不利于紧急预防接种与降低疫苗费用；（4）存在灭活不彻底和散毒的可能。而弱毒疫苗存在毒力返强、重组及潜在感染的危险。故疫苗在防制PRRSV中暴露出越来越多的问题。

1975年，瑞典科学家Boman等从惜古比天蚕蛹中诱导分离得到一种抗菌肽，并命名为Cecropin。天蚕素Cecropin D（CD）是家蚕体内cecropins家族的一种抗菌小肽，由36个氨基酸残基组成，分子量为3.9KDa，含有2段α-螺旋，中间由一段结节部位相连，N端经常是一些强碱性氨基酸残基，C端则由非极性氨基酸残基构成疏水性区域。目前已证明CD对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌有抗微生物学活性。而关于抗菌肽Cecropin D（CD）是否具有抗病毒活性，尤其是否具有抗PRRSV病毒的作用，至今还未见有相关的研究或报道。

发明内容