[发明专利]樱花品种红丰、市原虎尾和平野妹背的特异性标记引物有效

专利信息
申请号: 201510023091.5 申请日: 2015-01-16
公开(公告)号: CN104593367B 公开(公告)日: 2017-11-14
发明(设计)人: 赵庆杰;徐梁;李海波;杨少宗;魏海龙;柳新红 申请(专利权)人: 浙江省林业科学研究院
主分类号: C12N15/11 分类号: C12N15/11;C12Q1/68
代理公司: 杭州千克知识产权代理有限公司33246 代理人: 冷红梅
地址: 310023 浙江省*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 樱花 品种 虎尾 平野 特异性 标记 引物
【权利要求书】:

1.樱花品种“红丰”、“市原虎尾”和“平野妹背”的分子特异性标记引物,所述引物序列如下:

上游引物:5′-AGCGGCCGCTAAGCAG-3′;

下游引物:5′-AGCGGCCGCTACCTTTAC-3′。

2.一种利用权利要求1所述的分子特异性标记引物对樱花品种“红丰”、“市原虎尾”和“平野妹背”进行快速鉴定的方法,所述方法为:提取待测樱花品种叶片的基因组DNA作为模板,以所述分子特异性标记引物作为扩增引物,进行PCR扩增,对扩增产物进行电泳检测,若电泳结果出现938bp的特异DNA条带,则待测樱花品种为樱花品种“红丰”、“市原虎尾”或“平野妹背”之一,反之则否;所述分子特异性标记引物序列为:

上游引物:5′-AGCGGCCGCTAAGCAG-3′;

下游引物:5′-AGCGGCCGCTACCTTTAC-3′;

所述PCR扩增条件如下:95℃预变性3min;95℃变性40s,65℃退火40s,72℃延伸2min,共35个循环;最后于72℃补平7min,终止温度为4℃。

3.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述方法如下:

(1)取待测樱花叶片,加液氮磨碎,以SDS-CTAB法提取待测樱花叶片的基因组DNA;

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板,以所述分子特异性标记引物作为扩增引物,进行PCR扩增:

PCR扩增体系每25μL组成如下:

PCR扩增条件如下:

95℃预变性3min;95℃变性40s,65℃退火40s,72℃延伸2min,共35个循环;最后于72℃补平7min,终止温度为4℃;

(3)取步骤(2)扩增产物5μL,与1μL 0.25%溴酚兰缓冲液混匀,点样于1.5%的琼脂糖凝胶上,于1×TAE缓冲液中、5V/cm电压下电泳,电泳结束后EB染色,于自动凝胶图像分析仪上照相,若电泳结果出现938bp的DNA条带,则待测樱花品种为“红丰”、“市原虎尾”或“平野妹背”之一,反之则否。

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