[发明专利]樱花品种红丰、市原虎尾和平野妹背的特异性标记引物有效
申请号: | 201510023091.5 | 申请日: | 2015-01-16 |
公开(公告)号: | CN104593367B | 公开(公告)日: | 2017-11-14 |
发明(设计)人: | 赵庆杰;徐梁;李海波;杨少宗;魏海龙;柳新红 | 申请(专利权)人: | 浙江省林业科学研究院 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12Q1/68 |
代理公司: | 杭州千克知识产权代理有限公司33246 | 代理人: | 冷红梅 |
地址: | 310023 浙江省*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 樱花 品种 虎尾 平野 特异性 标记 引物 | ||
1.樱花品种“红丰”、“市原虎尾”和“平野妹背”的分子特异性标记引物,所述引物序列如下:
上游引物:5′-AGCGGCCGCTAAGCAG-3′;
下游引物:5′-AGCGGCCGCTACCTTTAC-3′。
2.一种利用权利要求1所述的分子特异性标记引物对樱花品种“红丰”、“市原虎尾”和“平野妹背”进行快速鉴定的方法,所述方法为:提取待测樱花品种叶片的基因组DNA作为模板,以所述分子特异性标记引物作为扩增引物,进行PCR扩增,对扩增产物进行电泳检测,若电泳结果出现938bp的特异DNA条带,则待测樱花品种为樱花品种“红丰”、“市原虎尾”或“平野妹背”之一,反之则否;所述分子特异性标记引物序列为:
上游引物:5′-AGCGGCCGCTAAGCAG-3′;
下游引物:5′-AGCGGCCGCTACCTTTAC-3′;
所述PCR扩增条件如下:95℃预变性3min;95℃变性40s,65℃退火40s,72℃延伸2min,共35个循环;最后于72℃补平7min,终止温度为4℃。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述方法如下:
(1)取待测樱花叶片,加液氮磨碎,以SDS-CTAB法提取待测樱花叶片的基因组DNA;
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板,以所述分子特异性标记引物作为扩增引物,进行PCR扩增:
PCR扩增体系每25μL组成如下:
PCR扩增条件如下:
95℃预变性3min;95℃变性40s,65℃退火40s,72℃延伸2min,共35个循环;最后于72℃补平7min,终止温度为4℃;
(3)取步骤(2)扩增产物5μL,与1μL 0.25%溴酚兰缓冲液混匀,点样于1.5%的琼脂糖凝胶上,于1×TAE缓冲液中、5V/cm电压下电泳,电泳结束后EB染色,于自动凝胶图像分析仪上照相,若电泳结果出现938bp的DNA条带,则待测樱花品种为“红丰”、“市原虎尾”或“平野妹背”之一,反之则否。
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