[发明专利]鸦胆子药材、鸦胆子油和鸦胆子油药物制剂的药效成分检测方法

权利要求书

1.一种鸦胆子药材的指纹图谱检测方法，同时检测鸦胆子药材中的鸦胆子水溶性药效成分和脂溶性药效成分，包括如下步骤：

第一步，建立鸦胆子药材中水溶性药效成分的标准指纹图谱：

(1)参照物溶液的制备

精密称取鸦胆子苦素A或鸦胆子亭醇适量，加注射用水溶解配制成浓度为0.1mg/ml的溶液，作为参照物溶液；

(2)供试品溶液的制备

精密称取鸦胆子粗粉，置于圆底烧瓶中，按照1:10-1:30g/ml加入注射用水，提取10-60min，静置，用0.2-0.5μm微孔滤膜过滤，即得；

(3)色谱条件

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；流动相：以乙腈或者甲醇为流动相A，以磷酸水溶液为流动相B，其中，磷酸水溶液的pH值为2.5-4；检测波长：270-290nm；柱温：30-40℃；进样量：5-50μL；梯度洗脱程序如下：

0-6min，流动相A与流动相B的体积比为2:98，流速1ml/min；

6-16min，流动相A与流动相B的体积比为3:97，流速1ml/min；

16-29min，流动相A与流动相B的体积比为10:90，流速1ml/min；

29-60min，流动相A与流动相B的体积比为15:85，流速1ml/min；

60-68min，流动相A与流动相B的体积比为45:55，流速1ml/min；

68-76min，流动相A与流动相B的体积比为90:10，流速1.5ml/min；

(4)测定

分别按参照物溶液和供试品溶液的制备方法制备参照物溶液和供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定；

(5)鸦胆子药材中水溶性药效成分标准指纹图谱的制定

通过对比来源于不同产地的鸦胆子药材中水溶性药效成分的指纹图谱，共标定了11个共有峰，作为标准指纹图谱；以鸦胆子苦素A为参照物，将标准指纹图谱中鸦胆子苦素A峰的相对保留时间和相对峰面积作为1，计算其它共有峰的相对保留时间和相对峰面积，1-11号共有峰的相对保留时间分别为：0.149，0.363，0.413，0.467，0.633，0.746，0.863，0.933，1.000，1.039，1.088；并对相似度进行评价；

第二步，建立鸦胆子药材中脂溶性药效成分的标准指纹图谱：

(1)参照物溶液的制备

精密称取三油酸甘油酯适量，加乙腈-二氯甲烷混合溶液或者异丙醇-正庚烷混合溶液溶解配制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为参照物溶液；

(2)供试品溶液的制备

精密称取鸦胆子粗粉，按照1:5-1:20g/ml加入60～90℃的石油醚，提取，过滤，滤液在室温至80℃的条件下蒸干溶剂，得鸦胆子油；

精密称取鸦胆子油，按1:2-2:1mg/ml置于量瓶中，加入乙腈-二氯甲烷混合溶液或者异丙醇-正庚烷2:1ml/ml混合溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，进样前过0.2-0.5μm滤膜；

(3)色谱条件

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；流动相：乙腈-二氯甲烷混合溶液，其中乙腈和二氯甲烷的体积比为65:35-72:28；流速0.1-1.0ml/min；柱温：30-40℃；进样量：5-20μl；蒸发光散射检测器参数：漂移管35-60℃，载气30-50Psi；

(4)测定

分别按参照物溶液和供试品溶液的制备方法制备参照物溶液和供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定；

(5)鸦胆子药材中脂溶性药效成分标准指纹图谱的制定

通过对比来源于不同产地的鸦胆子药材脂溶性药效成分的指纹图谱，共标定了11个共有峰，作为标准指纹图谱；以参照物三油酸甘油酯为参照物，将标准指纹图谱中三油酸甘油酯峰的相对保留时间和相对峰面积作为1，计算其它共有峰的相对保留时间和相对峰面积，1-11号共有峰的相对保留时间分别为：0.508，0.631，0.661，0.791，0.812，0.831，1.000，1.030，1.056，1.318，1.394；并对相似度进行评价；

第三步，按照上述步骤分别建立待测鸦胆子药材中水溶性药效成分指纹图谱和脂溶性药效成分指纹图谱，并分别与上述鸦胆子药材中水溶性药效成分标准指纹图谱和脂溶性药效成分标准指纹图谱进行对比计算相似度，以判断待测鸦胆子药材是否合格。