[发明专利]一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种小麦胚芽细胞活性蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)、采用35％的硫酸铵溶液对小麦胚芽蛋白溶液进行预沉淀，然后离心，得到上清液；

(b)、采用饱和硫酸铵溶液对上清液充分沉淀，离心，得到沉淀和上清液；

(c)、将沉淀溶解于PBS溶液后透析，去除硫酸铵，即得；

所述小麦胚芽蛋白溶液通过以下方法制备：

(a)、将小麦子粒浸泡于蒸馏水中，28-35℃下培养，培养的空气湿度为80％-85％，培养2-3d，粉碎至80-100目，得到粉碎混合物；

(b)、将所述粉碎混合物以5000r/min的转速离心，得到第一上清液；

(c)、将所述第一上清液以8000r/min的转速离心，得到含有胚芽细胞的第二上清液；

(d)、将所述第二上清液酶解，酶解的温度为25-27℃，时间为1-2h；

其中，所述酶解采用的酶解液含有糖酶、蛋白酶、脂肪酶、3-肌醇六磷酸酶；

所述糖酶的添加量为所述第二上清液重量的0.8％-1.2％；所述蛋白酶的添加量为所述第二上清液重量的0.05％-0.1％；所述脂肪酶的添加量为所述第二上清液重量的0.4％-0.5％；所述3-肌醇六磷酸酶的添加量为所述第二上清液重量的0.05％-0.15％；

(e)、在0-6℃的条件下，将酶解完成的混合物于18000r/min离心35min，得到的上清液即为小麦胚芽蛋白溶液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述硫酸铵溶液的体积与所述小麦胚芽蛋白溶液的体积为0.4-0.8:1。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述硫酸铵溶液的体积与所述小麦胚芽蛋白溶液的体积为0.5:1。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述离心为：在0-6℃条件下，以转速为5000r/min，离心20min。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述饱和硫酸铵溶液与所述第一上清溶液的体积比为1-1.2：1。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述饱和硫酸铵溶液与所述第一上清溶液的体积比为1:1。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述充分沉淀为：

在搅拌速度为180r/min条件下，将饱和硫酸铵添加到上清液中，添加完毕后混匀，得到混合液；

将得到的混合液于0-6℃条件下静置10h。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述离心为：在0-6℃条件下，以转速为10000r/min，离心35min。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，重复步骤(b)1次，收集沉淀。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(c)中，所述透析在0-6℃进行；

所述透析采用3500道尔顿的透析膜进行。

11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)具体为：

在搅拌速度为180r/min条件下，将35％的硫酸铵溶液添加到小麦胚芽蛋白溶液中，添加完毕后混匀，得到混合液；

将得到的混合液于0-6℃条件下静置4-6h。