[发明专利]一种检测食品中狍子源性成分的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体地说涉及检测食品中狍子源性成分的试剂盒及其应用。

背景技术

动物源性食品在人们日常膳食中的比例逐步增大，各种冷鲜肉、精深加工的半成品肉、熟肉制品等消费比例逐年上升。但不同物种的肉品质和价格存在很大差异，给掺杂掺假创造了极大的利润空间为了谋取经济利益，有些不法企业和商贩在肉制品中使用低成本肉代替高价位肉的现象时有发生。这不仅严重侵害了消费者的健康和权益，还会涉及宗教信仰，导致民族问题，同时直接影响到国家的形象，社会的和谐发展以及政府的公信力。

狍子肉作为一种肉食来源具有丰富的营养，和细嫩鲜美的口感，在中国特别是北方地区就有广大的消费人群。但市场上的狍子肉良莠不齐，真假难分，因此，研究出一种准确、快速、可靠地鉴别狍子源性成分的方法，就非常有必要。

随着分子生物学方法在食品检验中的应用不断深入，食品中动物源性成分的鉴别技术也在不断发展，鉴别精度和检测灵敏度的不断提高，目前已初步形成了以基因检测为基础的方法体系。以聚合酶链式反应(PCR)为基础的技术已成为食品中动物源性成分鉴定的核心方法。物种特异性PCR根据不同物种基因序列的差异位点设计特异性引物，利用PCR反应实现动物源性成分特征基因片段的指数级扩增，继而通过电泳检测鉴别可能的物种成分。多重PCR能够实现混合物中多个物种同时检测。近年来，实时荧光PCR技术是动物源性成分检测中研究最多的方法，与普通PCR相比，具有特异性强、灵敏度高、重现性好、有效降低污染等优点。

哺乳动物线粒体DNA(mtDNA)在遗传上相对独立，具有基因组小、没有重复序列、生物个体内无组织特异性、每个细胞中含有大量线粒体基因组等特点。因此，用mtDNA分子标记鉴别动物源性成分与核DNA分子标记相比，具有灵敏度高、精确度好、DNA降解小等优势。基于动物线粒体DNA的荧光PCR检测技术在动物源性成分鉴别中具有广阔的应用前景。

目前，根据线粒体基因组DNA序列差异设计物种特异性引物，建立PCR与实时荧光PCR方法已见大量报道，然而，针对狍子源性成分检测的荧光PCR方法尚未见报导。因此，建立动物源性产品中狍子源性成分实时荧光PCR检测方法，对提高突发事件应急处理能力，提升食品安全风险监测水平和监管能力具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测食品中狍子源性成分的试剂盒及其应用。

本发明首先提供用于检测食品中狍子源性成分的引物对以及荧光探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示。

本发明提供了上述引物对和荧光探针在检测食品中狍子源性成分中的应用。

本发明提供了上述引物对和荧光探针在制备检测食品中狍子源性成分试剂盒中的应用。

含有本发明引物对和荧光探针的试剂盒也属于本发明的保护范围。本发明的试剂盒可以是由多个隔断所形成，以容纳固定一个或多个如管或小瓶的容器。这些容器之一或者多个可以装有本发明的引物以及荧光探针，根据需要该引物和荧光探针可以是冻干形式或溶于缓冲液中的状态。另外，本发明的试剂盒中还可以包括用于荧光定量PCR反应的一种或多种酶/试剂，以及实施本发明所需要的其它成分及用具，例如DNA裂解液、荧光定量反应液、阴性模板、阳性模板，所述阴性模板为双蒸水，所述阳性模板为狍子基因组DNA。

进一步地，本发明的试剂盒其20μL工作体系为：

本发明试剂盒的工作程序为：预变性95℃10min；再经95℃变性15s，60℃退火1min，40个循环。

本发明每次检测标本时须设立阴性对照和阳性对照，在检测中两种对照为有效扩增时，样本结果判断标准如下：

Ct值<35.0时样品结果为阳性；

Ct值≥35.0的样品结果为阴性。

一种检测食品中狍子源性成分的方法，该方法以蛋白酶K消化法提取的食品中DNA，以其为模板，利用本发明提供的引物对和荧光探针进行荧光定量PCR扩增，根据Ct值判定结果。

含有本发明引物对和探针的诊断试剂也属于本发明的保护范围。

本发明试剂盒特异性好，检测方法快速简单，准确性高，灵敏度好，为食品中狍子源性成分的检测提供了新的方法。本发明所述的荧光RCR技术可以准确快速的实现对食品中狍子源性成分的鉴别检测，可在1h～2h内完成，具有快速、特异、敏感、高通量等优点，不仅能为检测狍子源性食品提供新的方法，而且能有效抵御肉制品掺假，加大对消费者利益的保护力度。

附图说明