[发明专利]一种悬浮培养发菜氨基酸的提取方法

说明书

技术领域

    本发明涉及生物技术领域，具体的说是一种悬浮培养发菜氨基酸的提取方法。

背景技术

    发菜（Nostoc flagelliforme），又称发状念珠藻，属蓝菌门念珠藻目，发菜主要产于中国西北部的干旱和半干旱地区，发菜是一种能固氮的光合原核生物，它的丝状体中主要有两种细胞：一种是营养细胞，呈绿色，进行光合作用，吸收、释放、合成有机物质；另一种是异形细胞，体积较大，细胞壁较厚，颜色较淡，主要进行固氮作用，把空气中的氮气还原成氨，合成氨基酸。

    发菜的营养价值很高，尤其是蛋白质的含量较高，每千克发菜中含蛋白质200～234.1克，还含有海胆酮、蓝藻叶黄素、藻蓝素和别藻蓝素等，营养成分高于同量的肉类与蛋类；发菜有较高的药用价值，其性平，味甘淡，有平肝潜阳、清肠止痢的功效；可清热解毒、化痰止咳、凉血明目、通便利尿，对佝偻病、痢疾、高血压、气管炎、鼻出血、营养不良等多种疾病都有一定疗效，并且发菜中具有高氨基酸评分的氨基酸组成，因此测定发菜中蛋白质的氨基酸的含量，对于评价发菜的营养与药用价值有重要意义。

氨基酸是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本的物质，与生物的生命活动有着密切的关系，是生物体内不可缺少的营养成分之一；研究一种操作简单、提取率高的从发菜中提取氨基酸的方法很有必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单、提取率高的从发菜中提取氨基酸的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种悬浮培养发菜氨基酸的提取方法，包括以下步骤：

步骤一：无菌条件下将发菜细胞接种到BG-11液体培养基中，然后按照12h光照12h黑暗的光照周期进行25℃恒温培养，光照强度为1800~2200Lux，恒温培养15~20天后，得发菜细胞培养液备用；

步骤二：将步骤一所得发菜细胞培养液抽滤后，取滤渣用水洗去黏状物质，去除发菜中的胶质，得发菜细胞，备用；

步骤三：将步骤二所得的发菜细胞于40~60℃条件下干燥至恒重，研磨粉碎，过40目筛网，得发菜细胞粉末备用；

步骤四：将步骤三所得的发菜细胞粉末按照l:20~1:50的料液比加入体积分数为30%~75%的乙醇水溶液，于水浴温度为50~80℃条件下超声提取30~75min，过滤，得发菜细胞提取液；

步骤五：将步骤四所得的发菜细胞提取液于3500~4500rpm条件下离心分离15~25min，取上清液，即得发菜氨基酸提取液；

所述步骤一中光照强度为2000Lux；

所述步骤三中将所得的发菜细胞于50℃条件下干燥至恒重；

所述步骤四中将所得的发菜细胞粉末按照l:40的料液比加入体积分数为60%的乙醇，于水浴温度为70℃条件下超声提取60min，过滤，得发菜细胞提取液；

所述步骤五中将所得的发菜细胞提取液于4000rpm条件下离心分离20min，取上清液，即得发菜氨基酸提取液。

本发明的有益效果：

本发明提供的悬浮培养发菜氨基酸的提取方法，采用悬浮培养发菜细胞，利用超声波提取发菜中的氨基酸，不仅能有效破碎细胞，而且还具有操作简单、提取时间短、消耗溶剂低、得率高、无需加热等优点，提取率可达到7.2%，为研究开发具有高氨基酸评价分的产品做出了贡献。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步的阐述。

实施例1

一种悬浮培养发菜氨基酸的提取方法，包括以下步骤：

步骤一：无菌条件下将发菜细胞接种到BG-11液体培养基中，然后按照12h光照12h黑暗的光照周期进行25℃恒温培养，光照强度为2000Lux，恒温培养18天，得发菜细胞培养液备用；

步骤二：将步骤一所得发菜细胞培养液抽滤后，取滤渣用水洗去黏状物质，去除发菜中的胶质，得发菜细胞，备用；

步骤三：将步骤二所得的发菜细胞于50℃条件下干燥至恒重，研磨粉碎，过40目筛网，得发菜细胞粉末备用；

步骤四：将步骤三所得的发菜细胞粉末按照1:40的料液比加入体积分数为60%的乙醇水溶液，于水浴温度为70℃条件下超声提取60min，过滤，得发菜细胞提取液；

步骤五：将步骤四所得的发菜细胞提取液于4000rpm条件下离心分离20min，取上清液，即得发菜氨基酸提取液。

实施例2

一种悬浮培养发菜氨基酸的提取方法，包括以下步骤：