[发明专利]中国仓鼠的微卫星标记及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体地，涉及中国仓鼠的微卫星标记序列及其在鉴定、检测中国仓鼠细胞中的应用。

背景技术

微卫星标记，又称短串联重复(STR)序列，是指以少数几个核苷酸(一般为1～6个)经过多次重复单位组成的简单多次串联重复序列，重复次数通常为10～30次。STR序列广泛分布在真核基因组中，长度一般在几十个碱基至几百个碱基之间。该序列两侧有保守的DNA序列，根据其两侧的保守序列设计引物，可用PCR方法扩增出STR位点的序列。由于STR重复单元的重复次数不同，因而扩增出的STR序列的长度呈现多态性。不同个体来源的细胞在不同STR位点具有特异性的重复次数，因而使得不同细胞具有其特征性的图谱，根据图谱的数据可以判定细胞是否为单一细胞。此外，由于STR序列还具有重复性高、共显性遗传的优点，特别是由于STR基因座的片段小、容易扩增、适宜于检验微量和降解检材，因而被广泛应用于遗传图谱的构建、基因定位、遗传关系的分析、品种鉴定等领域。

生物制品的生产中，要绝对避免细胞交叉污染。准确判定所用细胞是否为单一种类细胞而无其他细胞的污染，不仅是保证科学实验的基本条件，也是生物制品生产的最根本要求。目前已建立了多种方法用于细胞交叉污染的检测，包括遗传检查(如特征染色体标志)、遗传标志检查(如DNA指纹图谱、STR图谱，单核苷酸多态性标记)、免疫学检测(如组织相容性抗原、种特异性抗血清)和生物化学鉴别法(如同工酶检测)。当一种细胞被形态相似的另一种细胞污染时，很难通过形态学观察及时发现；传统的同工酶图谱分析也仅能鉴别不同种属的细胞。而短串联重复序列DNA检测方法的应用为鉴别细胞污染提供了一个有效手段。不同个体来源的细胞在不同STR位点具有特异性的重复次数，因而使得不同细胞具有其特征性的图谱，根据图谱的数据可以判定细胞是否为单一细胞。

中国仓鼠细胞是生物制品生产中应用最广的哺乳动物细胞。目前，关于该种细胞的STR鉴别尚属空白，还不能有效而便利地判定中国仓鼠细胞的单一性，无法从早期控制细胞的交叉污染。

发明内容

本发明的目的在于提供中国仓鼠的微卫星标记，检测该标记的引物、方法等，以解决上述问题。

在第一个方面，本发明提供中国仓鼠的微卫星标记，所述微卫星标记的序列如SEQ ID NO:1-5任意一条所示；在优选的实施方案中，所述微卫星标记由引物扩增而得，所述引物选自引物对SEQ ID NO:6+SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8+SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10+SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:12+SEQ ID NO:13以及SEQ ID NO:14+SEQ ID NO:15。

在第二个方面，本发明提供所述微卫星标记的应用，用于鉴定、鉴别中国仓鼠细胞，或鉴定中国仓鼠细胞中是否有其它细胞的污染等。

在第三个方面，本发明提供扩增中国仓鼠微卫星标记序列的引物对，所述引物对选自SEQ ID NO:6+SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8+SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10+SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:12+SEQ ID NO:13以及SEQ ID NO:14+SEQ ID NO:15。

在第四个方面，本发明提供中国仓鼠的微卫星标记群，所述微卫星标记群包括2、3、4或5个微卫星标记，所述微卫星标记的序列如SEQ ID NO:1-5所示。

另一种优选的实施方式中，所述中国仓鼠的微卫星标记群由引物扩增而得，所述引物选自引物对SEQ ID NO:6+SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8+SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10+SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:12+SEQ ID NO:13以及SEQ ID NO:14+SEQ ID NO:15。

在第五个方面，本发明提供一种筛选所述中国仓鼠微卫星标记的方法，包括：

(a)设定重复单元和重复单元的重复数目；优选地，选择8种4碱基重复，每种设定为12次重复，分别为(ATAC)₁₂、(GATA)₁₂、(AGTC)₁₂、(AGAC)₁₂、(TGAG)₁₂、(TGTC)₁₂、(TGAC)₁₂、(TCAC)₁₂；