[发明专利]一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法

权利要求书

1.一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将基片进行疏水处理，制得疏水基片；

2)将培养的细胞消化，然后与第一水凝胶溶胶混合，制成第一水凝胶溶胶细胞混合液；

其中，第一水凝胶溶胶为质量浓度3％～5％的明胶或甲基丙烯酸酰化明胶；

3)将第一水凝胶溶胶细胞混合液以0.05～2μL每液滴的形式沉积至步骤1)制得的疏水基片表面，形成半球状液滴，在0～20℃下静置至半球状液滴交联固化，制得载细胞的微尺度水凝胶模板；

4)在载细胞的微尺度水凝胶模板上方覆盖第二水凝胶溶胶，然后通过低温处理或紫外照射使第二水凝胶溶胶交联，形成第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构；

其中，第二水凝胶溶胶为质量浓度1％～5％的琼脂糖，或者为质量浓度5％～20％的聚乙二醇水凝胶及聚乙二醇水凝胶衍生物；

5)将第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构置于培养皿中，加入培养液后进行培养，直至第一水凝胶融化为溶胶，在此培养过程中，细胞在第二水凝胶微孔板的微孔中生长，形成细胞球。

2.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤1)所述疏水处理具体为：

将基片浸泡在疏水剂中处理后，烘干；所述疏水剂为子西莱自清洁剂；

或者，将基片进行硅烷化处理；

或者，将聚四氟乙烯薄膜贴在基片上，制得疏水表面。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，所述基片为玻璃基片或聚甲基丙烯酸甲酯基片。

4.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤3)是采用移液枪、注射器或细胞打印平台将步骤2)得到的第一水凝胶溶胶细胞混合液沉积到步骤1)制备的疏水基片表面形成半球状液滴。

5.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤3)所述的静置时间为10～60min。

6.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤4)所述的低温处理是在0～20℃下静置5～30min。

7.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤4)所述的紫外照射处理时间为10～120s。

8.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤5)所述的培养是将加入培养液的培养皿置于37℃、二氧化碳浓度为5％的培养箱中进行培养1～14d。

9.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤2)所述的培养的细胞为乳腺癌细胞MCF–7、造骨细胞、骨髓基质细胞、肝细胞、成纤维细胞、心肌细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、脂肪干细胞或神经前体细胞。

10.根据权利要求1或9所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤2)所述的第一水凝胶溶胶细胞混合液中细胞浓度为0.01×10⁷～5×10⁷个/mL。