[发明专利]一种用于检测毛发水酱油的方法

权利要求书

1.一种用于检测毛发水酱油的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)制备1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)-二氟化硼二吡咯甲烷并配制预定浓度的溶剂；

其中，制备1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)-二氟化硼二吡咯甲烷的过程包括：

1-1)称取1.06g邻硝基苯甲醛，溶于500mL干燥的CH₂Cl₂，在氮气保护的情况下，搅拌中缓慢滴加1.44mL 2,4-二甲基吡咯，滴入1滴三氟乙酸，密封，于25℃下保温搅拌过夜，直至薄层色谱检测邻硝基苯甲醛完全转化，然后，加入4.0mL三乙胺，25℃下搅拌10min，加入4.8mL三氟化硼乙醚，室温搅拌过夜，浓缩混合液至约150mL，饱和NaHCO₃溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，除去溶剂，然后利用硅胶柱层析提纯，得橙红色固体0.91g，其为TMPB-o-N；

1-2)将上面获得的0.91g TMPB-o-N溶于20mL CH₂Cl₂和20mL无水乙醇，加入0.1g 10％Pd/C，室温搅拌下常压通入氢气催化还原，薄层色谱监测反应进度，约8h后反应完成，迅速抽滤除去Pd/C，滤液旋转蒸发除去溶剂，抽干，得粗品0.79g，其为TMPB-o-A；

1-3)将上面所获得的0.79g TMPB-o-A溶于100mL冰乙酸中，搅拌下加入0.27g马来酸酐，搅拌2h，减压除去溶剂，硅胶柱层析提纯，得橙色纯品0.93g，其为1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)-二氟化硼二吡咯甲烷TMPAB-o-M；

1-4)对所得的TMPAB-o-M进行提纯获得1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)-二氟化硼二吡咯甲烷固体；

2)将预定量的1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)-二氟化硼二吡咯 甲烷固体溶于步骤1)中所配制的预定浓度的溶剂，获得用于检测毛发水酱油的测试试剂，

3)取预定量的酱油样品，对所述酱油样品进行预处理；

4)在所述酱油样品中加入还原剂；

5)向所述酱油样品中滴入预定量的所述测试试剂；

6)观察或检测滴入所述测试试剂后所述酱油样品的荧光，并基于所述荧光的强度判断所述酱油样品中胱氨酸的含量；

7)基于所述酱油样品中胱氨酸的含量确定所述酱油样品是否为毛发水酱油。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测试试剂中，1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)-二氟化硼二吡咯甲烷的浓度为1.0-3.0×10^-3M。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)-二氟化硼二吡咯甲烷的分子结构为：

。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤3)中，对所述酱油样品进行预处理包括：利用活性炭吸附所述酱油样品中的色素及杂质。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：配制不同浓度的标准半胱氨酸溶液，在每种浓度的标准半胱氨酸溶液中添加过 量的1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(2-马来酰亚胺)-二氟化硼二吡咯甲烷试剂，并且测量出在每种浓度下所获得的荧光的荧光强度，生成标准的半胱氨酸荧光强度与半胱氨酸浓度对照表。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤6)还包括：将所测得的所述酱油样品滴入所述测试试剂后的荧光强度与标准的荧光强度与半胱氨酸浓度对照表进行比较，并基于所述比较结果判断所述酱油样品中的半胱氨酸浓度，并且基于所述酱油样品中的半胱氨酸浓度判断所述酱油样品是否为毛发水酱油。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述还原剂为巯基类试剂、硼氢化物或磷化氢类还原剂。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶剂为二甲亚砜溶液(DMSO)或甲醇。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理还包括将所述酱油样品稀释至预定浓度。