[发明专利]一种抑制水霉菌的基因、含该基因的重组表达载体和重组工程菌以及基因的应用在审
申请号: | 201510027446.8 | 申请日: | 2015-01-20 |
公开(公告)号: | CN104593387A | 公开(公告)日: | 2015-05-06 |
发明(设计)人: | 秦玉广;刘浩;陈秀丽;宋理平;周嗣泉 | 申请(专利权)人: | 山东省淡水渔业研究院 |
主分类号: | C12N15/31 | 分类号: | C12N15/31;C12N15/11;C12N15/75;C12N1/21;A61K35/742;A61P31/10;C12R1/125 |
代理公司: | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人: | 贾波 |
地址: | 250013 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 抑制 霉菌 基因 重组 表达 载体 工程 以及 应用 | ||
1.一种抑制水霉菌的基因,其特征是:其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种重组表达载体,其特征是:含有权利要求1所述的抑制水霉菌的基因。
3.根据权利要求2所述的重组表达载体,其特征是:所述重组载体是由权利要求1 所述的抑制水霉菌的基因和质粒pBSA43 构建而得。
4.一种构建重组表达载体所需要的引物,其特征是:
上游引物为:5’-CGCGGATCCGCCGCTGCAACCGG -3’
下游引物为:5’-CCCAAGCTTACAAGCCGACCGCATTCC-3’。
5. 一种重组工程菌,其特征是:由权利要求2或3所述的重组表达载体转化入枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB600中构建而得。
6.一种权利要求5所述的重组工程菌的扩大培养方法,其特征是:将重组工程菌放入活化培养基中活化,然后接种入发酵培养基中,再向发酵培养基中加入卡那霉素,进行扩大培养,得菌悬液;将菌悬液离心,取上清液,为发酵菌液。
7.根据权利要求6的所述的扩大培养方法,其特征是:活化和发酵所用的培养基相同,组成如下: 蛋白胨15-20 g, 水解酪素8-12 g,氯化钠4-6 g,蒸馏水补至1000ml,121℃高压灭菌15分钟;发酵培养基中卡那霉素的用量为8-10ug/ml培养基。
8.根据权利要求6的所述的扩大培养方法,其特征是:活化时,将菌种在28-30℃、150-200rpm摇床培养过夜;发酵培养时,在28-30℃、150-200rpm培养24-40h。
9.一种权利要求1所述的抑制水霉菌的基因在制备防治鱼类水霉病中的生物制剂中的应用。
10.一种防治鱼类水霉病中的生物制剂,其特征是:以权利要求5所述的重组工程菌为有效成分, 或者以权利要求6所述的重组工程菌的扩大培养方法所得的菌悬液或发酵菌液为有效成分。
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