[发明专利]一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料及其制备方法

权利要求书

1.一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料，其特征在于，所述叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料以壳聚糖为载体，叶酸和生物素为配体，利用N-酰化反应制备叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料。

2.根据权利要求1所述的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料，其特征在于：所述壳聚糖分子量为20000-50000，脱乙酰度≥85％。

3.根据权利要求1所述的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料，其特征在于：所述叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料中叶酸和生物素的接枝率均≥5％。

4.一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料的制备方法，其特征在于步骤如下：

1)制备壳聚糖溶液：将壳聚糖溶于醋酸溶液中，得到浓度为5-10mg/mL的壳聚糖溶液，并调节pH值至4.7-6.0，备用；

2)制备琥珀酰亚胺基生物素酯：将DCC、NHS与生物素按摩尔比1.2-1.5:1:1混合后于50-60℃条件下反应16-24h，过滤后在冰浴条件下向滤液中滴加乙醚析出沉淀，然后用异丙醇对沉淀进行重结晶，过滤收集结晶并用DMF溶解结晶，过滤后逐滴加入无水乙醚中，冷藏过夜，移走上清液，室温下真空干燥得到琥珀酰亚胺基生物素酯，备用；

3)制备具有氨基反应活性的叶酸活性酯溶液：将叶酸溶于无水DMSO中，并加入EDC.HCl，在避光条件下于25-40℃磁力搅拌反应1-4h，得到叶酸活性酯溶液，浓度以叶酸质量浓度计为26-44mg/mL，备用；

4)将步骤2)所得琥珀酰亚胺基生物素酯溶于DMF中，得到浓度为20-34mg/mL的生物素酯溶液，在磁力搅拌条件下，将生物素酯溶液缓慢加入步骤1)所得壳聚糖溶液中，在室温条件下反应至反应液澄清，然后在搅拌条件下缓慢加入步骤3)所得叶酸活性酯溶液，在室温下继续反应12-24h，反应结束后将反应液移入透析袋，于蒸馏水中透析3d，每6h换水一次，透析后经冷冻干燥即得到叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料。

5.根据权利要求4所述的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料的制备方法，其特征在于：步骤3)所述叶酸与EDC.HCl的摩尔比为1:5-10。

6.根据权利要求4所述的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料的制备方法，其特征在于：步骤4)所述琥珀酰亚胺基生物素酯与壳聚糖的摩尔比为20-30:1；所述叶酸活性酯与壳聚糖的摩尔比为20-30:1。