[发明专利]一种检测宫颈癌标志物CDKN2A抗原表位多肽及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种通过生物信息学模拟筛选的具有检测宫颈癌标志物CDKN2A多肽片段，人群流行病学检测验证了其检测敏感度及特异度，为进一步用于制备宫颈癌早期诊断试剂盒奠定基础。

背景技术

大量研究表明，血清或血浆中的肿瘤相关抗原能诱导机体产生自身抗体，在肿瘤患者血清中既存在肿瘤抗原，也存在针对该肿瘤抗原的自身抗体。因此，既可以利用抗体检测肿瘤抗原，也可以利用抗原检测肿瘤抗原的自身抗体，但利用肿瘤自身抗体检测肿瘤的特异性和敏感性均比利用肿瘤抗原检测肿瘤要高得多。很多肿瘤相关抗原不仅在肿瘤患者体内存在，在正常人体内也存在，因此检测肿瘤相关抗原作为诊断依据可信性差。而肿瘤自身抗体在正常人体内含量很低检测不到或根本不存在，若体内肿瘤自身抗体水平明显增高，则表明体内存在异常免疫情况，表明体内相关抗原水平发生波动，预示疾病的存在或原有疾病加重。

近年来的研究表明，在恶性肿瘤体积发展到可用现代影像学技术检出之前3-5年，患者血中可出现高浓度的肿瘤相关抗原自身抗体。因此，检测血中肿瘤相关抗原自身抗体具有预测肿瘤发病风险和早期诊断肿瘤的重要价值。是肿瘤临床诊断领域的重点发展方向之一。在国外已有诊断肺癌和乳腺癌的早期诊断试剂盒市售。然而，目前所报道的自身抗体检测方法敏感度低，特异性差，假阴性比率可高达50％以上。其主要原因是由于每一种肿瘤相关抗原自身抗体在癌症患者中的阳性检测率平均在10％左右。如何提高诊断试剂敏感度是当前需要亟待解决的关键问题。比较行之有效的方法是寻找新的可充当肿瘤标志物的自身抗体，然后与现有已知的肿瘤相关抗原自身抗体组合成具有敏感度高和特异性强的诊断试剂盒。

多重肿瘤抑制基因CDKN2A，又名p16，定位于人类染色体9p21的抑癌基因，直接参与细胞周期调控，它编码一种分子量为15845Da的蛋白质，内含有一个的开放阅读框架，由148个氨基酸组成。CDKN2A基因可直接作用于细胞周期，抑制细胞的分裂；CDKN2A蛋白可抑制细胞周期依赖性激酶4和6，阻止细胞从G1期进入S期，从而抑制癌细胞成长。当CDKN2A基因失活，引起G1期缩短，细胞周期加速，特别是DNA在没有修复前过早进入S期，这可能是细胞恶化的关键。

CDKN2A蛋白位于细胞浆和细胞核内。除脑、骨骼和肌肉外，广泛地表达于各种组织器官。当患者接受化疗、放疗后，肿瘤细胞死亡会释放出大量的CDKN2A蛋白的碎片，诱导免疫系统产生自身抗体。

发明内容

本发明提供一种检测宫颈癌标志物CDKN2A抗原表位多肽及应用。

本发明采取的技术方案是：

一种检测宫颈癌标志物CDKN2A抗原表位多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所述。

H-DWLATAAARGRVEEVRGALPNAPNSYGRRPDC-OH

其纯度>95％，pH>7.0。

本发明所述的检测宫颈癌标志物CDKN2A抗原表位多肽在制备宫颈癌早期诊断试剂盒中的应用。

本发明利用自行设计的CDKN2A蛋白的线性多肽，采用ELISA法检测宫颈肿瘤患者血清及血浆中抗CDKN2A蛋白的特异性自身IgG抗体。自身IgG抗体水平升高表明肿瘤患者体内CDKN2A蛋白的表达量增加，预示患者可能出现原发性或继发性宫颈癌，可以预测宫颈癌发生与复发的危险性，指导临床医生对宫颈癌的早期诊断。

本发明优点是通过自行设计的CDKN2A的抗原表位多肽，检测宫颈癌患者血清及血浆中自身抗体表达水平并开发相应的试剂，预测宫颈癌发生的危险性，并为制备宫颈癌早期诊断试剂奠定基础。

附图说明

图1是宫颈癌患者体内抗CDKN2A的IgG抗体水平的ROC曲线分析图。

具体实施方式

一种检测宫颈癌标志物CDKN2A抗原表位多肽的氨基酸序列，如SEQ ID NO：1所述。

H-DWLATAAARGRVEEVRGALPNAPNSYGRRPDC-OH

其纯度>95％，pH>7.0。

本发明所述的检测宫颈癌标志物CDKN2A抗原表位多肽在制备宫颈癌早期诊断试剂盒中的应用。