[发明专利]一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法

权利要求书

1.一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法，其特征在于，以胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Batalin)为原料，该方法依次经以下步骤：

(1)胀果甘草的总提取物的制备。

(2)水溶性和脂溶性成分分离。

(3)水溶性成分中甘草酸和甘草色素与甘草葡聚糖、甘草多糖的分离。

(4)甘草酸和甘草色素的纯化。

(5)甘草葡聚糖与甘草多糖的分离。

(6)脂溶性成分中光甘草定的分离纯化。

(7)脂溶性成分中甘草素、异甘草素的分离纯化。

(8)脂溶性成分中甘草苷、异甘草苷的分离纯化。

(9)脂溶性成分中甘草查尔酮的分离纯化。

(10)脂溶性成分中甘草木质素的分离纯化。

(11)脂溶性成分中甘草纤维素的分离纯化。

2.根据权利1所述的一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法，其特征在于，步骤(1)中提取剂为吡啶，吗啉，二甲基亚砜，二甲基甲酰胺中之一或混合和液，以氢氧化钠或氢氧化钾调节pH10-13，逆流强制循环提取三次，第一次10倍量(V/W)回流下提取2.0h；第二次8倍量(V/W)回流下提取1.5h；第三次6倍量(V/W)回流下提取1.0h。以用盐酸、硫酸或磷酸中之一调节中性，减压浓缩至比重1.15-1.20，得到甘草总提取物。

3.根据权利1所述的一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法，其特征在于，步骤(2)中加入甘草总提取物10，8，6倍量(W/W)的纯化水分别在60-80℃溶解三次，过滤，水液和沉淀分离，得到水溶性和脂溶性成分。

4.根据权利1所述的一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法，其特征在于，步骤(3)中所得的水溶液水液通过D-101大孔树脂吸附，先水洗，得到甘草葡聚糖和甘草多糖混合水溶液，再以10-20％乙醇洗脱，收集洗脱液，得到甘草酸乙醇溶液。，再以50-80％乙醇洗脱，得到甘草色素乙醇溶液，浓缩至比重1.05-1.15，得到甘草色素浓缩物。

5.根据权利1所述的一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法，其特征在于，步骤(4)中将(3)中所得的甘草酸乙醇溶液减压浓缩至比重1.05-1.20，放置结晶，得到粗品甘草酸，粗品干燥后加入加入正己烷，石油醚，6^#溶剂油，乙酸乙酯中之一，再滴加少量无水乙醇，搅拌均匀，直至洗去色素为止，真空干燥，得到白色甘草酸。将(3)中甘草色素乙醇溶液减压浓缩至比重1.05-1.20，加入适量石油醚，6^#溶剂油，乙酸乙酯中之一，搅拌均匀，结晶，结晶物再以正己烷，石油醚，6^#溶剂油，乙酸乙酯中之一洗涤，得到白色甘草色素。

6.根据权利1所述的一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法，其特征在于，步骤(5)中将(4)中所得的水液通过Sephadex LH20凝胶柱色谱，水洗，得到甘草多糖洗脱液，浓缩，加入3-5％(W/W)的H₂O₂在60℃下加热30min，加入丙酮沉淀，收集沉淀，干燥，得到甘草多糖。再用10-20％氯化钠溶液洗脱，得到甘草葡聚糖，加入3-5％(W/W)的H₂O₂在60℃下加热30min，浓缩至干，加入吡啶，二甲基甲酰胺，二甲基亚砜中之一溶解，过滤，收集滤液，浓缩至1/5体积后加入甲醇或乙醇沉淀，收集沉淀，干燥，得到甘草葡聚糖。

7.根据权利1所述的一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法，其特征在于，步骤(6)中将脂溶性沉淀真空干燥，得干燥物，分别用正己烷，石油醚，6^#溶剂油，乙醚中之一提取3次，第一次5倍量(V/W)萃取脱脂，第二次4倍量(V/W)萃取脱脂，第三次3倍量(V/W)萃取脱脂，收集脱脂后的液体，脱脂溶剂回收。脱脂后的甘草黄酮混合物以三氯甲烷，甲苯或二氯甲烷提取3次，第一次5倍量(V/W)萃取脱脂，第二次4倍量(V/W)萃取脱脂，第三次3倍量(V/W)，合并提取液，得到光甘草定提取液，减压浓缩至比重1.05-1.20以中性氧化铝湿法上柱，先以纯三氯甲烷洗脱，再以三氯甲烷∶乙酸乙酯＝40∶10-40∶15(v/v)为洗脱溶剂，流速为1.2mL/min，进样浓度为2mg/mL，洗脱方式以线形梯洗脱，柱床体选25，柱温为室温。TLC检查合并相同流份，浓缩，结晶，得到白色光甘草定。