[发明专利]金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法在审
| 申请号： | 201510029417.5 | 申请日： | 2015-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN104531818A | 公开（公告）日： | 2015-04-22 |
| 发明（设计）人： | 张学武;何胜洁 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/34 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 何淑珍 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 金钱龟 肿瘤 多肽 制备 方法 | ||
1. 金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于,包括如下步骤：
（1）取3～20 g金钱龟肉糜和超纯水混合后搅拌，配制成浓度为10～50% (w/v)的混合溶液，取质量和浓度都相同的混合溶液三份，分别加入木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶37017和复合蛋白酶Protamex，进行酶解，酶解过程中使用0.05～0.2 mol/L的NaOH或HCl来调节反应体系的pH值，控制pH值在pH±0.05之间，酶解完毕后灭酶，冷至室温，将酶解液离心，取上清液，得到三种酶解液；
（2）取步骤（1）得到的三种酶解液，依次用截留分子量分别为10 KD、5 KD以及3 KD的超滤膜过滤，每种酶解液分别获得分子量大小范围为0-3 KD、3-5 KD和大于10 KD的金钱龟多肽的酶解液。
2. 根据权利要求1所述的金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述木瓜蛋白酶水解条件是：pH=6～8，酶解温度45～65℃，酶解时间6～12 h，酶与底物浓度比为0.2～0.7%（w/w）。
3. 根据权利要求1所述的金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述碱性蛋白酶37017水解条件是：pH=6～9，酶解温度30～60℃，酶解时间4～14 h，酶与底物浓度比为2～7%（w /w）。
4. 根据权利要求1所述的金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述复合蛋白酶Protamex水解条件是：pH=5～9，酶解温度35～55℃，酶解时间3～10 h，酶与底物浓度比为0.2～0.8%（w/w）。
5. 根据权利要求1所述的金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述灭酶为在80～100℃水中灭酶10～20 min。
6. 根据权利要求1所述的金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述离心为在6000～10000 r/min下离心30～60 min。
7. 根据权利要求1所述的金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的超滤在CO2的压力为0.1～0.25 MPa的室温下用超滤杯结合超滤膜超滤。
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