[发明专利]一种基于真菌微生物快速破壁及其裂解物可用于基因扩增的方法在审
| 申请号： | 201510030761.6 | 申请日： | 2015-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN104711194A | 公开（公告）日： | 2015-06-17 |
| 发明（设计）人： | 赵喜华;唐平平;李非;胡姿姿 | 申请（专利权）人： | 江西师范大学 |
| 主分类号： | C12N1/06 | 分类号： | C12N1/06;C12N15/10;C12R1/66;C12R1/80;C12R1/885 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 330000 *** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 真菌 微生物 快速 及其 裂解 用于 基因 扩增 方法 | ||
1.一种真菌微生物快速破壁的方法,其特征在于将处理好的真菌微生物运用基因扩增仪通过以下程序快速破壁：
2-6℃，10-30分钟；
35-39℃，10-30分钟；
93-97℃，10-20分钟；
将真菌微生物裂解物作为基因扩增模板。
2.一种基于真菌微生物快速破壁的裂解物可用于基因扩增的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1）真菌微生物收集；
2）用真菌微生物裂解物，取0.1-1.0μL裂解物作为模板进行PCR反应，获取基因产物；所述PCR反应参数包括：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸60s，30 个循环；72℃延伸10min ；
3）通过特异性引物扩增真菌微生物基因，采用电泳检测所述扩增产物。
3.一种基于真菌微生物快速破壁的裂解物可用于基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：0.2-1.0μM 上游引物；0.2-1.0μM 下游引物；0.05-1U/μL Taq DNA 聚合酶混合缓冲液， 20μM Tris-HCL，pH8.3，100μM KCL，3-4μM MgCL2 ；灭菌双蒸水。
4.根据权利要求3所述的基于真菌微生物快速破壁的裂解物可用于基因扩增的试剂盒，其特征在于：所述 Taq DNA 聚合酶混合缓冲液包括TaqDNA 聚合酶、dATP、dTTP、dCTP 及dGTP 各400-500μM。
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