[发明专利]一株分泌抗重组日本血吸虫烯醇化酶特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明提供一株分泌抗重组日本血吸虫烯醇化酶（Sj Enolase蛋白）特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞、一种抗Sj Enolase特异性单克隆抗体及其制备方法；提供一种以抗重组Sj Enolase特异性单克隆抗体为捕获抗体，以抗Sj Enolase特异性多克隆抗体为检测抗体的夹心法检测Sj Enolase蛋白的酶联免疫学方法。属于基因工程、单抗制备及免疫诊断技术领域。

背景技术

 血吸虫病是严重威胁热带与亚热带地区人类健康的重要寄生虫病，在中国目前已被列入政府重点控制的第二大重要的公共卫生问题。经过半个多世纪的艰苦努力，我国的血吸虫病流行已得到有效的控制，流行区人群的血吸虫感染率低于1%，基本达到人群传播阻断的目标。但是，血吸虫病是一个人兽共患病，自然界存在大量的保虫宿主（如：猪、牛、羊、犬、鼠等多种易感宿主），血吸虫的中间宿主钉螺广泛分布，难以彻底消灭。因此，引起血吸虫病暴发流行的因素仍然存在，难以在短时间内消灭血吸虫病的流行。虽然我国的血吸虫感染率已经降低至极低的水平，但是，我国仍有454个县有血吸虫病流行。由于人群感染率处于极低状态，过去那种大规模的普查普治的运动式防治工作模式，已经不适用于当今防治工作的需要，会造成大量的人力、物力及财力的浪费，大规模的药物灭螺还会造成严重的环境污染及生态破坏。因此，准确地发现散在分布的现症感染血吸虫病人或动物，及时治愈患者，消灭传染源，对阻断血吸虫感染的传播，防止疫情暴发具有重要的意义。因此，需要建立高度敏感、特异的血吸虫现症感染实验室检测方法，以满足目前低度感染流行状态的血吸虫病防治工作的需要。血吸虫现症感染检测方法包括：

病原学检测

日本血吸虫病原学检测方法包括显微镜检法，从患者粪便检查是否存在虫卵，或采用毛蚴孵化法观察是否能在患者粪便中孵化出血吸虫的毛蚴，这是血吸虫现症感染确诊的金标准方法。但是，这种方法影响因素很多，在低度感染状态下极易漏检，敏感性低，依从性差，不易被病人及检测人员所接受。而且，虫卵出现在患者粪便中需要在血吸虫感染后3周以后，检测虫卵没有早期诊断价值。病原学检测方法不能满足当前血吸虫低感染度流行状态的需要。

核酸检测

发现来源于血吸虫细胞的核酸成分（包括DNA、RNA），是宿主体内存在现症感染的客观指征。采用核酸扩增的方法(如PCR法、LAMP法)，或免疫学方法检测患者血清、排泄分泌物（粪便、尿液）中的血吸虫特异性DNA片段，具有对血吸虫现症感染进行确诊的价值。但是，核酸检测方法普遍存在对操作人员技术要求高、需要复杂的仪器设备、检测成本高、检测时程长、难以批量检测等的问题，不适宜在血吸虫病流行区现场大规模应用。

免疫学检测

免疫学检测方法 包括循环抗体的检测与循环抗原的检测两种。循环抗体检测方法是检测血吸虫感染宿主后，其抗原分子刺激宿主免疫系统产生的抗血吸虫抗原的特异性抗体分子。由于一般抗体存在宿主体内的时间很长，只能表明宿主体内曾经发生过血吸虫感染，但不能作为现症感染的指征，可用于血吸虫感染者的筛查。随着血吸虫感染免疫研究工作的进展，人们发现血吸虫的一些抗原分子在宿主体内可以诱导短寿抗体反应，参与短寿抗体反应的抗原特异性抗体随着虫体（或抗原）的存在而产生，经过治疗后，随着虫体的消失而消失，检测这种参与短寿抗体反应的抗原特异性抗体具有对血吸虫现症感染进行确诊与疗效考核价值。但是，该方法仍在研究之中，尚没有成熟试剂盒形成。循环抗原是来自于血吸虫虫体本身的蛋白成分，存在于患者的血液、尿液或唾液中。只有患者体内存活虫体，其体液才可能存在血吸虫的循环抗原分子，是血吸虫现症感染的客观指征，检测患者体液中的循环抗原具有对血吸虫现症感染进行确诊与疗效考核的价值。长期以来，血吸虫病循环抗原检测方法的研究始终是人们研究的热点课题，已经建立了多种不同的循环抗原的检测方法。这些方法用于诊断血吸虫病的特异性好，但缺点是检测靶标不明确，敏感性普遍不足。

因此，选择血吸虫排泄分泌抗原成分中含量丰度高的靶分子作为要检测靶标，并构建合适的检测方法，是提高血吸虫病循环抗原检测方法敏感性的关键。

发明内容

    本发明目的是提供一株分泌抗日本血吸虫烯醇化酶（Sj Enolase）特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，一种抗日本血吸虫烯醇化酶（Sj Enolase）特异性单克隆抗体，和一种检测Sj Enolase蛋白夹心酶联免疫吸附方法，以实现提高对血吸虫现症感染进行确诊效果的目的。

    本发明的技术方案：为达到上述目的，本发明选择血吸虫成虫呕吐排泄物中蛋白含量最高的烯醇化酶（Sj Enolase）作为循环抗原检测的靶标分子。