[发明专利]一种检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂盒

权利要求书

1.检测端粒酶hTERT mRNA表达水平的引物，其特征在于，包括如下引物序列：

(1)端粒酶hTERT基因的引物序列：

hTERT-F：5’-GGCCGATTGTGAACATGGA-3’；

hTERT-R：5’-CCTCTTTTCTCTGCGGAACGT-3’；

(2)端粒酶hTERT基因的探针序列：

hTERT-P：5’-TACGTCGTGGGAGCCA-3’，且其5’端与荧光报告基团相连，3’端与荧光淬灭基团相连。

2.根据权利要求1所述的检测端粒酶hTERT mRNA表达水平的引物，其特征在于，端粒酶hTERT基因的探针序列5’端连接的荧光报告基团为FAM，3’端连接的荧光淬灭基团为MGB。

3.权利要求1所述的检测端粒酶hTERT mRNA表达水平的引物在制备检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂中的应用。

4.一种检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含权利要求1～2所述的引物。

5.根据权利要求4所述的检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括如下试剂：总RNA提取试剂、反转录试剂、荧光定量PCR反应试剂、质控品。

6.根据权利要求4所述的检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂盒，其特征在于，所述的总RNA提取试剂的包括如下试剂：

(1)细胞裂解液Trizol：体积分数为56％的重蒸苯酚，异硫氰酸胍28.2g/L，柠檬酸钠溶液14.9mmol/L，十二烷基肌氨酸钠3g/L，醋酸钠112.7mmol/L，溶剂为双蒸水；

(2)萃取液：氯仿；

(3)沉淀剂：异丙醇；

(4)漂洗液：体积分数为75％的乙醇；

(5)RNA溶剂：无RNA酶的水。

7.根据权利要求4所述的检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂盒，其特征在于，所述的反转录试剂包括如下试剂：

(1)逆转录反应缓冲液：250mmol/L Tris-cl，375mmol/L KCl，15mmol/L MgCl₂，50mmol/L DTT，pH8.3；

(2)dNTP混合物：10mmol/L dATP，10mmol/L dTTP，10mmol/L dCTP，10mmol/L dGTP；

(3)逆转录酶液：20mmol/L Tris-cl，200mmol/L NaCl，0.1mmol/L EDTA，1.0mmol/L DTT，体积分数为50％的甘油，200U/μL逆转录酶，40U/μL RNA酶抑制剂，pH7.5；

(4)引物混合物：寡脱氧胸苷酸引物，随机6核苷酸引物；

(5)超纯水：电阻18.2兆欧。

8.根据权利要求4所述的检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂盒，其特征在于，所述的荧光定量PCR反应试剂的包括如下试剂：

(1)RT-PCR反应液：10mmol/L dATP，10mmol/L dTTP，10mmol/L dCTP，10mmol/L dGTP，25mmol/L MgCl₂，5U/μL TaqDNA聚合酶，100mmol/L Tris-cl，500mmol/L KCl，15mmol/L MgCl₂，pH8.5；

(2)超纯水：电阻18.2兆欧。

9.根据权利要求4所述的检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂盒，其特征在于，所述的质控品包括如下组分：

(1)阳性质控品：含端粒酶hTERT基因的重组质粒pGM-hTERT，提取纯化浓度为250mg/mL，拷贝数为2.6x10⁴copies/μL；

(2)阴性质控品：超纯水。

10.权利要求4～9所述的检测全血或血清样品中端粒酶的活性程度的试剂盒在制备检测端粒酶活性程度试剂中的应用。