[发明专利]一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法

权利要求书

1.一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)从自然海区采集生态浮床植物海马齿根际周围的水样，运回实验室；

2)将步骤1)采集的水样加入含菲无机盐培养基中培养7d后，取培养液转接至菲-无机盐培养基中再培养7d后，移取培养液进行10^－1～10^－8梯度稀释，分别取10^－4，10^－6，10^－8各100μL菌液涂布于2216E固体培养基上，继续培养4～7d，待平板长出菌落；

3)取步骤2)长出菌落的平板，应用平板升华法进行多环芳烃降解菌筛选，得多环芳烃降解菌。

2.如权利要求1所述一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于在步骤1)中，所述自然海区为中国福建省厦门市筼筜湖；所述生态浮床植物海马齿可采用铺设于筼筜湖内湖至少3年的海马齿。

3.如权利要求1所述一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于在步骤1)中，所述生态浮床植物海马齿根际周围的水样是生态浮床植物海马齿根际周围2cm半径内的水样；所述运回实验室是可用冰盒保存运回实验室。

4.如权利要求1所述一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于在步骤2)中，所述水样与含菲无机盐培养基的体积比为1∶9；水样的量最好为5mL。

5.如权利要求1所述一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于在步骤2)中，所述含菲无机盐培养基的组成为硫酸铵2.38g，七水硫酸亚铁0.278mg，1M磷酸钾缓冲液100μL，陈海水750mL，蒸馏水250mL，菲50mg，pH 7.6。

6.如权利要求1所述一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于在步骤2)中，所述培养的条件是在摇床中以150rpm，25℃培养。

7.如权利要求1所述一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于在步骤2)中，所述2216E固体培养基的组成为：蛋白胨5g，酵母提取物1g，磷酸高铁0.01g，陈海水1000mL，琼脂15g，pH 7.6～7.8。

8.如权利要求1所述一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于在步骤2)中，所述继续培养，是在25℃恒温生化培养箱中培养4～7d。

9.如权利要求1所述一种从水体植物根系筛选多环芳烃降解菌的方法，其特征在于在步骤3)中，所述应用平板升华法进行多环芳烃降解菌筛选的具体方法为：

(1)往500mL的玻璃烧杯里添加5mL 10mg/mL的菲-二氯甲烷溶液，在通风橱里让二氯甲烷自然挥发；

(2)取长出菌落的平板，将平板反扣在烧杯口上，用封口膜密封二者接触的地方，再取一相同半径的平皿，平皿内放上冰块，置于平板上；

(3)94℃水浴5min，将烧杯与平板取出，冷却，揭膜，平板表面形成薄薄一层白色的菲气雾；

(4)将平板放回25℃恒温生化培养箱中继续培养，24h后观察，若菌落周围形成透明圈，即表示该菌能利用菲，确认为多环芳烃降解菌。

10.Novosphingobium resinovorum R3，已于2014年11月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10019。