[发明专利]一种功能化氧化石墨烯载体的制备方法及其应用在审
申请号: | 201510035161.9 | 申请日: | 2015-01-26 |
公开(公告)号: | CN104650240A | 公开(公告)日: | 2015-05-27 |
发明(设计)人: | 张业旺;李越;江晓萍;刘彩虹 | 申请(专利权)人: | 江苏大学 |
主分类号: | C07K17/14 | 分类号: | C07K17/14;C12N11/14;C01B31/04 |
代理公司: | 无 | 代理人: | 无 |
地址: | 212013 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 功能 氧化 石墨 载体 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种功能化氧化石墨烯载体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将P-β-硫酸酯乙基砜苯胺SESA溶解在蒸馏水中,在30-50℃下用1mol/L的Na2CO3溶液将pH调至中性,然后加入氧化石墨烯,并用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH到9.0-14.0,进行醚化反应,反应结束后,用蒸馏水清洗数次,得到对氨基苯磺酰乙基氧化石墨烯ABSE-GO;
(2)将蒸馏水、HCl溶液、NaNO2溶液的混合液加入到步骤(1)制备的ABSE-GO中发生重氮化反应,反应结束后,用HCl溶液清洗数次,真空干燥后,得到功能化氧化石墨烯载体。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述蒸馏水中SESA的浓度为1mg/ml,SESA和氧化石墨烯的质量之比为1:1。
3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述醚化反应的温度为100-200℃,时间为20-60min。
4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述HCl溶液的浓度为:0.5-2M;NaNO2溶液的质量百分浓度为:5-10%;所述蒸馏水、HCl溶液、NaNO2溶液的体积比为2:1:1。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述重氮化反应的条件为:冰浴,反应时间为20-60min;所述真空干燥的温度为25-50℃,时间为10-20h。
6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述SESA与NaNO2的质量比为4:1。
7.如权利要求1~6所述的制备方法制备得到的功能化氧化石墨烯载体,将其应用于蛋白质的固定化。
8.一种功能化氧化石墨烯载体应用于蛋白质固定化的方法,其特征在于,
具体应用方法为:
称取25-50mg的上述功能化氧化石墨烯置于离心管中,加入0.2-1ml的蛋白质溶液,再加入pH 3.0-12.0的缓冲液,使其总反应体积为1 ml,反应1-60min后,离心取出部分上清液,再加入1ml上述缓冲液,混匀后离心,取出部分上清液,继续加入1ml上述缓冲液,混匀后离心,除去全部上清液,采用Brandford法测定两次上清液中的蛋白含量,并计算固定化收率,采用DNS显色法或PDAB法测定固定化酶的酶活,并计算固定化效率。
9.如权利要求8所述的一种功能化氧化石墨烯载体应用于蛋白质固定化的方法,其特征在于,所述蛋白质,包括纤维素酶,青霉素G酰化酶或牛血清蛋白。
10.如权利要求8所述的一种功能化氧化石墨烯载体应用于蛋白质固定化的方法,其特征在于,所述缓冲液为柠檬酸缓冲液,磷酸盐缓冲液或Tris,HEPES缓冲液。
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