[发明专利]表达西尼罗热病毒PrM/E蛋白的重组新城疫LaSota疫苗株

说明书

技术领域

本发明提供一种表达西尼罗热病毒(West Nile virus，WNV)PrM/E蛋白的重组新城疫病毒LaSota疫苗株及其应用。具体而言，本发明提供表达西尼罗热病毒PrM/E蛋白的重组新城疫病毒LaSota疫苗株rLa-WNV-PrM/E(其保藏号为CGMCC No.10199)及其在制备用于预防西尼罗热的疫苗中的应用。

背景技术

西尼罗病毒(West Nile Virus，WNV)是一种由库蚊传播的虫媒病毒。WNV属于黄病毒科黄病毒属，广泛分布于非洲，欧洲西南部，俄罗斯，中东，印度以及澳大利亚。该病毒于1999年传入北美[1，2]。西尼罗病毒在血清学上属于日本脑炎血清群，同群的病毒还有圣路易斯脑炎病毒，墨累山谷脑炎病毒，日本脑炎病毒和昆津病毒。1998年以色列从发病的鹳上分离到1系WNV病毒，其引起的临床症状为脑炎和瘫痪。1999年，纽约市发生WNV疫情，分离得到的NY99株1系WNV病毒[3]。美国第一次WNV严重爆发发生在2003年，9000人感染，死亡265人。第二次严重爆发发生在2012年，5387人感染，243人死亡。与2003年爆发相比，2012年感染人群中呈现神经症状的病例比例大幅上升。2012年西尼罗热在意大利，以色列，俄罗斯，塞尔维亚，突尼斯和希腊均有发生，总计167例[4]。

西尼罗热病毒宿主范围较广，能够感染人，马，狗，绵羊，羊驼等[5，6]，大部分动物呈隐形感染，极少数呈现临床症状。大部分人感染西尼罗热病毒只引起温和症状或不典型临床症状，表现为高热，皮疹，头痛，肌肉酸疼等；少部分人发展成为严重的致死性神经症状，如脑炎，脑脊髓炎以及相关的并发症，该病的潜伏期一般为3-12天[7，8]。鸟类，尤其是乌鸦是WNV的重要储存宿主，迁徙鸟类在病毒散播过程中起重要作用[3]。吸血节肢动物如蚊虫、沙蝇、蠓、壁虱等是西尼罗病毒的传播媒介，库蚊、伊蚊、按蚊等蚊虫是该病的主要传播媒介，其中美洲大陆的尖音库蚊是美洲主要的传播媒介。现已证实WNV在蚊虫与鸟类中循环。人类主要通过带病毒的蚊虫叮咬而感染西尼罗病毒[9]。

WNV基因组表达的多聚蛋白，被蛋白酶切割产生三个结构蛋白C，PrM和E蛋白以及7个非结构蛋白。C蛋白是是病毒核衣壳的主要成分。PrM是病毒细胞膜锚定蛋白以及病毒相关的M蛋白的前体蛋白。PrM蛋白羧基端含有一段跨膜区域，该区域可以协助PrM蛋白与细胞膜结合，同时也可以作为E蛋白的信号肽，同时研究证实PrM蛋白与E蛋白的正确折叠密切相关[10-12]。此外，PrM可以与E蛋白结合形成异源二聚体蛋白进而组装成未成熟的病毒粒子[13]。当病毒从细胞内释放时，位于高尔基复合体的furin蛋白酶以及其它蛋白酶会将其切割成为成熟的M蛋白，从而形成成熟的病毒粒子[14]。WNV的E蛋白是其最重要的结构蛋白，其在病毒复制周期的多个环节起关键的作用，其功能包括受体结合、膜融合、病毒组装以及出芽释放等。E蛋白是诱导机体产生中和抗体的最主要结构蛋白[15，16]。E蛋白也能够诱导具有免疫保护效力的CTL杀伤性T细胞免疫反应[17]。

西尼罗热是一种重要的人兽共患病，我国目前尚未发现西尼罗病毒脑炎病例，没有分离到西尼罗病毒。近年来，随着国际人员和物资流动加快，感染者、带毒畜禽和媒介蚊虫传入我国的可能性日益增加。加之西尼罗病毒主要分布在北纬23.50°-南纬66.50°的温带地区，而我国大部分领土处在这一地区，并有适宜的鸟类宿主、易感动物和媒介蚊虫分布，因此面临着西尼罗病毒输入和流行的威胁。由此，亟需开发出一种具有前瞻性和储备性、安全高效的西尼罗热防控候选疫苗。

发明内容

本发明的目的是开发一种具有前瞻性和储备性、安全高效的西尼罗热防控候选疫苗。

为实现上述目的，本发明人利用重组新城疫病毒反向遗传操作系统，构建了表达西尼罗热病毒PrM/E蛋白的重组新城疫病毒，实验表明该重组病毒在小鼠中安全有效，能够诱导高水平的中和抗体和E蛋白特异性CD4+和CD8+T细胞免疫反应。研究结果表明该重组病毒是优秀的西尼罗热储备疫苗，对我国应对该病的威胁具有重要战略意义。

因此，本发明提供一种表达西尼罗热病毒(West Nile virus，WNV)PrM/E蛋白的重组新城疫病毒LaSota疫苗株及其制备方法和应用。具体而言，本发明提供表达西尼罗热病毒PrM/E蛋白的重组新城疫病毒LaSota疫苗株rLa-WNV-PrM/E(其保藏号为CGMCC No.10199)及其在制备用于预防西尼罗热的疫苗中的应用。