[发明专利]一种嗜碱微球菌及其产生的碱性木聚糖酶和应用

权利要求书

1.一种嗜碱微球菌，其特征在于：名称为嗜碱微球菌(Micrococcus sp.)S1，于2014年6月27日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2014295。

2.根据权利要求1所述的嗜碱微球菌，其特征在于：用于培养权利要求1所述的嗜碱微球菌的液体选择培养基的配方为：木聚糖5～8.0g/L，KNO₃ 1.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，NaCl 10～15g/L，KH₂PO₄ 1.5g/L，pH8.0～9.0。

3.根据权利要求2所述的嗜碱微球菌，其特征在于：所述的液体选择培养基的配方为：木聚糖8.0g/L，KNO₃ 1.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，NaCl 15g/L，KH₂PO₄ 1.5g/L，pH9.0。

4.一种碱性木聚糖酶的制备方法，其特征在于：所述的碱性木聚糖酶按下述方法制得：

(1)粗酶液的提取

将权利要求1所述的嗜碱微球菌S1菌种接到液体选择培养基中，于37℃、200rpm培养48h，将48h培养液以14000rpm的转速冷冻离心20min，取上清液；利用3000道尔顿超滤浓缩膜将上清液超滤浓缩，即得粗酶液，用于离子交换层析；

(2)碱性木聚糖酶的分离纯化

(a)阴离子交换层析

离子交换层析的介质为DEAE Sepharose Fast Flow；缓冲液体系采用pH值为8.0的Tris-HCl缓冲液，平衡液为pH 8.0Tris-HCl缓冲液，洗脱液为含NaCl pH8.0Tris-HCl缓冲液；取100mL介质小心灌入规格为Φ2.6cm×30cm的层析柱中，使得凝胶均匀且无气泡；用300mL的平衡液进行平衡，直至A280稳定后上样，待穿透峰出现之后收集穿透峰，透析、浓缩；

(b)阳离子交换层析

层析介质为SP Sepharose Fast Flow；缓冲液体系采用pH值为6.0的PBS缓冲液；把阴离子交换层析所得酶活峰透析浓缩，加入到预先用pH值为6.0的PBS缓冲液平衡好的层析柱上，以60mL·h^-1的流速用含NaCl的pH6.0的PBS缓冲液洗脱，收集具有酶活性的洗脱峰，通过透析浓缩，得到碱性木聚糖酶，并置于4℃保存备用。

5.权利要求1所述的嗜碱微球菌在造纸工业中的应用。