[发明专利]重组酿酒酵母表达HBsAg的制备工艺及其分离纯化工艺、HBsAg和乙肝疫苗

权利要求书

1.一种重组酿酒酵母表达HBsAg的分离纯化工艺，包括有：

细胞破碎步骤，将经过发酵后提取的酵母细胞供入高压匀浆器内，在15000±1500PSIG压力下对其进行细胞破碎；

纯化步骤，对破碎后的料液进行纯化，制备HBsAg原液；

其特征在于，在所述细胞破碎步骤后、纯化步骤之前还包括：

料液加热步骤，对破碎后的料液进行加热操作，使其温度上升到50-80℃后，再将其降温到2～8℃。

2.如权利要求1所述的分离纯化工艺，其特征在于，在所述料液加热步骤中，使其温度上升到60-80℃。

3.如权利要求2所述的分离纯化工艺，其特征在于，在所述料液加热步骤中，使其温度上升到60-70℃。

4.如权利要求3所述的分离纯化工艺，其特征在于，在所述料液加热步骤中，使其温度上升到65±1℃。

5.如权利要求1-4中任一项所述的分离纯化工艺，其特征在于，在所述料液加热步骤中，通过在套设于所述匀浆器外部的夹套中传递传热介质，对所述匀浆器内经细胞破碎后的料液进行加热。

6.如权利要求5所述的分离纯化工艺，其特征在于，所述夹套中传热介质的传递方向与匀浆器内料液的流动方向相反。

7.如权利要求5所述的分离纯化工艺，其特征在于，在所述细胞破碎步骤之前包括：

冷冻悬液融化步骤，将经过发酵后提取并冷冻保存的酵母细胞悬液从冷冻保存装置中转移到温度稳定在26±1℃的水浴锅内，至其融化完成；

所述提纯步骤包括：

澄清抗原制备步骤，除去在所述匀浆器破碎并加热后的料液中的酵母菌碎片后，通过加入硅胶380吸附目标抗原，并通过引入硼酸，将抗原由硅胶上解吸附，收集合并洗脱液，制备成澄清抗原；

原液制备步骤，将所述澄清抗原进一步用疏水色谱法纯化HBsAg，用硫氰酸盐处理，用磷酸盐缓冲液稀释，除菌过滤后即为原液。

8.一种重组酿酒酵母表达HBsAg的制备工艺，包括发酵步骤和分离纯化步骤，其特征在于，所述分离纯化步骤采用如权利要求1-7中任一项所述的分离纯化工艺。

9.一种重组酿酒酵母表达的HBsAg，其特征在于：该HBsAg采用如权利要求8所述的工艺生产制得。

10.一种乙肝疫苗，其特征在于：该乙肝疫苗的活性成分包括有如权利要求9所述的重组酿酒酵母表达的HBsAg。