[发明专利]高压脉冲电场辅助酶解提取河蚌多糖工艺

说明书

技术领域：本发明涉及河蚌多糖的高压脉冲电场(PEF)辅助酶解提取技术，特别是涉及利用响应曲面优化河蚌多糖提取条件的方法。

背景技术：自二十世纪六十年代以来，人们对多糖物质所具有的抗肿瘤、抗辐射损伤、提高人体免疫等功能给予了高度重视，我国在这方面也做了许多研究工作，特别是从中药中提取多糖，并对这些多糖在抑制肿瘤及其它一些生理活性等方面进行了大量研究。实验证明，生物多糖除具有抗肿瘤、抗辐射、增加免疫功能外，还具有抗病毒、抗感染、抗衰老、降血脂、降血压、降血糖等多种生理、药理活性，并且无副作用。粘多糖是一种重要的生物多糖，由于含有糖醛酸和硫酸基，所以又称酸性粘多糖。由于它具有一些特殊功效，近二十多年来倍受人们关注，相继从多种动物组织中提取并获得应用。进入21世纪，人们又热衷于从贝类，如牡蛎、扇贝等软体组织提取粘多糖。自上世纪九十年代，我国、日本等国家开展了从河蚌、田螺等淡水贝类中提取粘多糖的研究。研究表明，河蚌多糖与其它动物粘多糖一样属于酸性粘多糖，河蚌多糖不仅有植物多糖的临床治疗效果，还有动物粘多糖在抗肿瘤、抗辐射、抗凝血、增强免疫功能等功效。此外，河蚌多糖在治疗晕眩、盗汗、慢性肝炎、烧烫伤以及降血脂等心脑血管疾病方面有其特殊的功效。目前关于贝类养殖技术方面的研究及报道很多，但有关贝类多糖的提取方法和工艺方面的研究及报道甚少。贝类多糖的提取可采用水提法、碱提法、超临界流体萃取法、酶提法等。传统水提法产率较低，提取时间长，耗能大，提取成本高；碱提法有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色；超临界流体萃取法提取多糖原料利用率高，产品得率高等优点，但设备复杂，运行成本高。

发明内容：基于上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的旨在提供一种以河蚌内脏为原料，利用高压脉冲电场新技术与酶相结合提取河蚌多糖的方法。该方法工艺简单，可提高河蚌多糖的得率，具有提取条件温和、杂质易于去除等优点，可实现河蚌多糖的低成本高效提取。

其工艺流程及其控制条件如下：

A.原料及处理：将鲜活河蚌用水清洗干净，沥干后用刀将其剖开，取其全部内脏组织冷冻备用。

B.打浆：将河蚌内脏组织从冰柜中取出，在室温下自然解冻，用打浆机打浆。

C.匀浆：将打浆后的浆液用胶体磨匀浆，得到均匀的浆液。

D.高压脉冲电场处理：按料液比6g/mL将河蚌匀浆液与水混合均匀，经高压脉冲电场处理，电场强度25～35kv/cm，脉冲数6～10个。

E.酶解提取：将经高压脉冲电场处理后的浆液调pH为7.5，加入质量分数为0.4％、比活力为8×10⁵U/g的木瓜蛋白酶，搅拌后置于恒温水浴振荡器中，作用温度55℃、酶解时间1～2h，然后置于90℃水浴中灭酶10min。

F.分离：将灭酶后的河蚌酶解液冷却后离心(4000r/min、10min)取上清液，即为河蚌多糖母液。

G.浓缩：将得到的河蚌多糖母液置于旋转蒸发器中，在50℃条件下减压浓缩至原体积的1/10左右。

H.醇沉：向浓缩液中边搅拌边加入3倍体积无水乙醇沉淀约12h，离心(4000r/min、15min)取沉淀物，得到河蚌多糖水溶性粗提物。

I.Sevag法脱蛋白：将粗提物加适量水溶解，再加入1/5溶液体积的三氯甲烷-正丁醇(V:V＝5:1)混合液，摇床剧烈振荡(约25min)，分液漏斗静止(约25min)使其分层，去除下层乳白色有机溶剂-蛋白相。将上层液用相同方法反复脱蛋白若干次(约需5次以上)，直至分液漏斗内两液面间无蛋白层为止。

J.二次浓缩：将上层液置旋转蒸发器中50℃减压浓缩至原体积的1/3～1/2。

K.二次醇沉：向浓缩液中加9倍体积无水乙醇沉淀12h，离心(4000r/min、15min)取沉淀物。

L.干燥：将沉淀物置于50℃干燥箱中干燥，得河蚌多糖。

本发明具有以下优点和效果：

1.本发明可用采珠后的河蚌内脏，甚至于用剔除蚌肉后的下脚料为原料提取多糖，对综合利用河蚌资源、提高产品附加值和养蚌的经济效益并扩大淡水养殖资源的开发具有重要意义；

2.本发明确立了高压脉冲电场与酶解相结合的方法使河蚌内脏组织能更多地分解出多糖，提高多糖得率；