[发明专利]伊文氏蓝或其衍生物修饰的Exendin-4及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种Exendin-4衍生物，其特征在于：为伊文氏蓝或其衍生物偶联到CysEX4的C末端半胱氨酸巯基上获得的衍生物，

所述CysEX4的氨基酸序列为：

His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-The-Ser-Asp-Xaa10-Ser-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Glu-Xaa16-Xaa17-Ala-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Phe-IIe-Xaa24-Trp-Leu-Xaa27-Xaa28-Gly-Xaa30-Xaa31-Xaa32-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Cys-NH₂；其中：

Xaa2 是 Gly，Thr，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa10 是 Leu，Ala，Ser，He，Glu 或 Lys ；

Xaa12 是 Lys，Leu，Thr，Ser， Ile 或 Cys ；

Xaa13 是 Gln，Thr，Ala，Val，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa14 是 Met，Tyr，Thr，Ala，Ser，Ile 或 Lys ；

Xaa16 是 Glu，Lys，Ala，Ser，Leu，Trp 或 Thr ；

Xaa17 是 Glu，Asp，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa19 是 Val，Cys，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa20 是 Arg，Thr，Tyr，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa21 是 Leu，Thr，Ala，Asp，Glu，His 或 Lys ；

Xaa24 是 Glu，Leu，Thr，Ala，Ser，Lys 或 Ile ；

Xaa27 是 Lys，Ala，Ser，Leu，Thr，或Ile ；

Xaa28 是 Asp，Thr，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa30 是 Gly，Thr，Ala，Ser，Leu，Ile 或 Arg ；

Xaa31 是 Pro，Val，Ser，Ala，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa32 是 Ser，Thr，Glu， Asp，Lys 或 Ile ；

Xaa33 是 Thr，Ser，Ala，Met，Leu，Ile 或 Lys ；

Xaa34 是 Gly，Thr，Met，Ser，He，Leu 或 Lys ；

Xaa35 是 Ala，Thr， Glu，Leu，Ile 或 Phe ；

Xaa36 是 Pro，Ala，Thr，Ser，Leu，Ile 或 Cys ；

Xaa37 是 Pro，Thr，Ser，Ala，His，Lys 或 Ile ；

Xaa38 是 Pro，Thr，Val，Ser，Leu，Lys 或 Ile ；

Xaa39 是 Ser，Tyr，Ala，Leu， Ile 或 Lys ；

所述CysEX4通过化学合成获得或通过基因工程重组表达的方式获得；

所述伊文氏蓝或其衍生物为伊文氏蓝琥珀酰亚胺基丙酸酯、伊文氏蓝N-羟基琥珀酰亚胺、伊文氏蓝醛、伊文氏蓝马来酰亚胺、伊文氏蓝吡啶基二硫酚或伊文氏蓝碘代乙酰基；

所述Exendin-4衍生物在保持原有Exendin-4生物活性的基础上，具备更长的体内半衰期。

2.一种制备权利要求1所述的Exendin-4衍生物的方法，其特征在于：其步骤如下：

（1）含有还原剂的醋酸钠溶液中CysEX4与伊文氏蓝或其衍生物偶联反应；

（2）在避光条件下，4℃，反应2小时，储存步骤（1）的反应混合物；

（3）从反应混合物中移除未反应物质并从中分离和提纯伊文氏蓝或其衍生物单独修饰的CysEX4。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，在伊文氏蓝或其衍生物与CysEX4偶联反应中，采用的还原剂为NaCNBH₃。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，伊文氏蓝或其衍生物与CysEX4的摩尔比为1:1。