[发明专利]一种小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1的应用。

背景技术

表皮蜡质是覆盖在植物表面最外层的保护物质，植物叶表皮蜡质成分复杂，通常被认为是一类有机物质的混合物，借助气相色谱-质谱，研究者发现主要的成分为长链的脂肪酸、醇、醛、酯和n～烷烃。植物叶表的蜡质成分及形态在不同的种，同一种的不同生长阶段，甚至同一个种的不同品种中都有变化。植物外部的非生物因素往往影响着其表皮蜡质的合成与分泌，蜡质成分会因各种水、旱胁迫、臭氧、酸雾、水冲洗和污染物等的出现发生变化。据研究结果表明，决定表皮水分散失程度的一个重要因素是蜡质的化学成分，而不是蜡层厚度。由此，作物表皮蜡质作为一种综合抗性指标，在最近几年成为国内外的一个研究热点。目前，通过人工选育新品种来提高植物的抗旱性和果实保鲜性，既耗时又费力，而且效率低下；相反，通过转基因技术过量表达蜡质合成基因，可以提高植物表皮蜡质含量，提高植物的抗旱性和果实的保鲜，既方便又快捷。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1的应用，该小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1可调控超长链脂肪醇合成，从而可提高植物表皮蜡质成分。

本发明解决其技术问题采用的技术方案是，

本发明之SEQ ID NO：1所示的小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1在植物育种中的应用。

本发明从NCBI数据库中查询获得FAR基因的序列信息，以小麦品种明988苗期叶片的cDNA为模板，以序列如SEQ ID No：2和SEQ ID No：3所示的上下游引物进行RT-PCR扩增，获得TaFAR1基因的全长序列如SEQ ID No：1所示；经PCR扩增后，将得到的TaFAR1基因的1578bp编码区连接到35S启动子驱动的植物表达双元载体pCXSN，获得融合表达载体TaFAR1-pCXSN；转化大肠杆菌DH5α，并将测序确认的重组质粒转入农杆菌，通过农杆菌介导的转化法转化植物品种，获得过量表达TaFAR1的转基因植株。

本发明之SEQ ID NO：1所示的小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1在提高植物抗旱能力中的应用。

本发明之SEQ ID NO：1所示的小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1在提高果实保鲜中的应用。

本发明之SEQ ID NO：1所示的小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1在培育产超长链脂肪醇的酵母菌株中的应用。

本发明将带有Hind III和EcoR I酶切位点的TaFAR1编码区连接到经过Hind III和EcoR I双酶切的酵母表达载体pYES2，获得融合表达载体TaFAR1-pYES2，转化大肠杆菌DH5α，挑选阳性克隆经测序确认后，提取质粒DNA，通过PEG法转入酿酒酵母菌株。

本发明之小麦超长链脂肪醇合成酶基因TaFAR1的应用，与现有技术相比，可使获得表达TaFAR1基因的酵母发酵生产超长链脂肪醇，也可使过量表达TaFAR1基因的植物抗旱性显著增强，生产的果实保鲜时间延长。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步加以说明。

实施例1：培育产超长链脂肪醇的酿酒酵母菌株的实验

1、TaFAR1基因的克隆：从NCBI数据库中查询获得FAR基因的序列信息，以小麦品种明988苗期叶片的cDNA为模板，设计引物为：

TaFAR1(F)：5’ATGGTGGGCACGCTGGATGAGG 3’，如SEQ ID No：2所示；

TaFAR1(R)：5’TCACTTGAGGACGTACTTCATG 3’，如SEQ ID No：3所示；

PCR反应体系为：在50μl反应体系，内含DNA模板5μl，上下游引物各2.5μl，dNTP 10μl，Buffer 25μl，KOD聚合酶1μl，ddH₂O4μl；PCR反应程序：94℃预变性2min；98℃变性10s、60℃退火30s、68℃延伸2min，共进行35次循环；68℃延伸10min，10℃保存；进行RT-PCR扩增，PCR产物回收纯化后，连接到克隆载体pMD^TM 18-T，转化大肠杆菌DH5α，挑选阳性克隆测序，获得TaFAR1基因的全长序列，如SEQ ID No：1所示。