[发明专利]一种猪支原体肺炎疫苗株

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的猪支原体肺炎疫苗株，属于兽医生物学技术领域。

背景技术

猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine，MPS)又称猪喘气病，主要是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)引起的一种猪的接触性、慢性、非致死性的呼吸道疾病。主要临床症状为咳嗽和气喘，病变特征是肺的尖叶、心叶、中间叶和膈叶前缘呈“肉样”或“虾肉样”实变。容易继发其他致病菌(如多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌等)的感染，使死亡率升高，且严重影响猪的生长发育和饲料转化率，因而给养猪业造成巨大的经济损失。目前猪支原体肺炎的主要防治措施是疫苗和药物，但长期用药易产生耐药性，从而需要大剂量反复用药，又会造成肉品中药物残留等食品安全问题。故进行该病的疫苗研发对本病的预防和控制具有重要的意义。

目前，国内自主研发上市的猪支原体肺炎疫苗只有弱毒疫苗，但该疫苗需要胸腔接种，不易于推广普及，而国外兽药公司研发生产的猪支原体肺炎灭活疫苗价格较为昂贵。因此，分离出一株免疫原性好、且可用于制备灭活疫苗的菌株，将填补国内无自主研发猪支原体肺炎灭活疫苗的空白。但猪肺炎支原体体外培养对营养要求高且生长速度缓慢，分离过程中易受猪鼻支原体等的影响，导致猪肺炎支原体分离难度较大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪支原体肺炎疫苗株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：9909，保藏日期为2014年11月06日，分类命名为猪肺炎支原体Mycoplasma hyopneumoniae，菌株号为CJ，该疫苗株在制备的无细胞培养基中生长2-3日含菌量即可达到1.0×10^9-10CCU/ml，并具有良好的免疫原性。

本发明所述的一种猪支原体肺炎疫苗株，该疫苗株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：9909，保藏日期为2014年11月06日，分类命名为猪肺炎支原体Mycoplasma hyopneumoniae，菌株号为CJ。该疫苗株用于制备猪肺炎支原体感染引发疾病的预防用兽用生物制品或兽药。

本发明所述的一种猪支原体肺炎疫苗株中的改良Friis液体培养基是由基础培养基为PPLO肉汤粉3.0-5.0g、脑心浸液粉2.0-4.0g、去离子水660-740.0ml，辅助培养基为10×汉克氏平衡盐溶液20-40.0ml、酵母浸出液20-40.0ml、青霉素100-300U/ml、杆菌肽粉5-20U/ml、0.25％酚红5-10.0ml和灭活的猪血清100-250.0ml混合制成；

本发明所述的改良Friis固体培养基是由基础培养基为PPLO肉汤粉3.0-5.0g、脑心浸液粉2.0-4.0g、去离子水660-740.0ml和琼脂粉10-15.0g，辅助培养基为10×汉克氏平衡盐溶液20-40.0ml、酵母浸出液20-40.0ml、青霉素100-300U/ml、杆菌肽粉5-20U/ml、0.25％酚红5-10.0ml和灭活的猪血清100-250.0ml混合制成。

本发明所述的一种猪支原体肺炎疫苗株的有益效果：

(1)新菌株培养时间短：该菌株接种我公司研发的改良Friis液体培养基，培养时间短，含菌量高，培养2-3日含菌量即可达到1.0×10^9-10CCU/ml，而有报道的其他菌株的培养时间为5-10日，含菌量可达到1.0×10^8-9CCU/ml；

(2)新菌株免疫原性好：本发明的猪支原体肺炎疫苗株是从国内商品猪上分离得到的新菌株，对于商品猪具有良好的免疫原性，保证了疫苗的免疫效力，避开了猪肺炎支原体只对地方品种猪具有易感性的缺陷；

(3)新菌株生产疫苗简便：该菌株含菌量高，制备疫苗无需浓缩；可用甲醛灭活，且灭活时间短，只需2小时，很大程度上减少了灭活剂对抗原的影响，且甲醛本身是一种防腐剂，用其来灭活兼顾了灭活和防腐，减少了用量以及对动物的不良反应；使用铝盐佐剂(氢氧化铝胶)作为佐剂，安全有效；制备工艺简单，抗原经甲醛灭活后，与铝胶混合1小时即成，没有繁琐的乳化工艺。

附图说明

图1和图2为本发明PCR鉴定结果图，其中图1M为DL2000；—为阴性对照；+为阳性对照(J株)；1-18为病料样品；图2M为DL2000；—为阴性对照；+为阳性对照(J株)；19-30为病料样品；