[发明专利]一种多细胞因子序贯缓释微球‑水凝胶复合系统及其制备方法

权利要求书

1.一种多细胞因子序贯缓释微球-水凝胶复合系统，其特征在于该复合系统按重量份计包括以下的组分：

IGF-1 PLGA微球 0.2~2份

TGF-ß3 PLGA微球0.2~2份

SDF-10.001~0.01份

PLGA-PEG-PLGA1~10份；

所述的IGF-1 PLGA微球的制备方法如下：

1）把1mg rhIGF-1冻干粉溶于100μl去离子水中，调配为浓度为10mg/ml的水溶液，作为内层水相，即W1相；

2）取500mg PLGA和140mg Span-80溶解于10ml二氯甲烷中，作为油相，即O相；

3）将W1相加入O相中，冰浴下用超声细胞粉碎机超声乳化1min后，形成初乳液W1/O；

4）持续搅拌下将 W1/O初乳液缓慢匀速加入到100ml含150mg tween-80的2% (w/v)的PVA水溶液中，PVA水溶液即外层水相W2，冰浴下3000rpm匀速磁力搅拌10min，形成 W1/O/W2双层复乳液；

5）然后常温下500rpm匀速磁力搅拌6h，除去有机溶剂后固化，然后冲洗过滤，10000rpm离心10min，得到IGF-1 PLGA微球，-20℃保存备用；

所述的TGF-ß3 PLGA微球的制备方法如下：

1）把1mg rh TGF-ß3冻干粉溶于100μl去离子水中，调配为浓度为10mg/ml的水溶液，作为内层水相，即W1相；

2）取500mg PLGA和140mg Span-80溶解于10ml二氯甲烷中，作为油相，即O相；

3）将W1相加入O相中，冰浴下用超声细胞粉碎机超声乳化1min后，形成初乳液W1/O；

4）持续搅拌下将 W1/O初乳液缓慢匀速加入到100ml含150mg tween-80的2% (w/v)的PVA水溶液中，PVA水溶液即外层水相W2，冰浴下3000rpm匀速磁力搅拌10min，形成 W1/O/W2双层复乳液；

5）然后常温下500rpm匀速磁力搅拌6h，除去有机溶剂后固化；然后冲洗过滤，10000rpm离心10min，得到TGF-ß3 PLGA微球，-20℃保存备用；

所述的PLGA-PEG-PLGA水凝胶的制备方法如下：

1）按DLLA:GA:PEG=6:1:3的比例称取一定量的DLLA、GA和PEG1500放入烘箱中干燥2h后混匀加入到真空聚合反应瓶中，室温放置2h冷却，再加入催化剂异辛酸亚锡，异辛酸亚锡重量百分比浓度为0.02%，反复通氮、抽真空，脱除痕量水分和氧气，抽真空封管，加热到150℃反应10h，得到PLGA-PEG共聚物；

2）将聚合物溶解于二氯甲烷中，乙醇沉淀析出，得到纯化的聚合物，真空干燥至恒重得到粘稠透明产物，置于-20℃保存备用。

2.根据权利要求1所述的一种多细胞因子序贯缓释微球-水凝胶复合系统，其特征在于该复合系统按重量份计包括以下的组分：

IGF-1 PLGA微球0.5~1.5份

TGF-ß3 PLGA微球 0.5~1.5份

SDF-1 0.001~0.01份

PLGA-PEG-PLGA 1~10份。

3.一种制备权利要求1~2任意一项权利要求所述的多细胞因子序贯缓释微球-水凝胶复合系统的方法，其特征在于该方法：用去离子水配置质量分数为15~30%的PLGA-PEG-PLGA水凝胶溶液，称取适量 IGF-1 PLGA微球和TGF-ß3PLGA微球加入水凝胶溶液中，再加入适量SDF-1冻干粉，整个过程在冰面上操作，并持续缓慢搅拌。