[发明专利]一种铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种铁皮石斛内生真菌菌株及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

植物内生真菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌，与菌根真菌只存在于植物根系不同，内生真菌在植株的地下和地上部分的任何组织器官都能存在(Faeth&Fagan，2002)。研究发现：植物内生真菌不仅包括了互惠共利的和中性的内共生真菌，也包括了那些潜伏在宿主体内的病原菌；有的内生真菌能促进宿主植物的生长、增强宿主的抗逆性、促进宿主植物活性成分的合成和积累，在提高植物产量和质量中可以起到积极作用。因此，内生真菌与植物的互作研究己日益受到研究者的关注，并成为内生真菌研究领域的国际热点。

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)属兰科附生草本植物，是我国传统名贵中药，广泛运用于慢性咽炎、闭塞性周围血管病、白内障、青光眼等疾病的治疗药方及各种保健品中，市场需求量很大，长期无节制的采挖造成其资源枯竭，已无野生资源可用。近年来，铁皮石斛的人工种植已在浙江、云南等地大规模开展，成为一个新兴产业。因此，研究筛选具有明显促生作用的铁皮石斛内生真菌菌株，将对铁皮石斛的大规模人工种植具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有明显促生作用的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01及其在铁皮石斛生长中的应用。

本发明所提供的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01，在分类学上属于麦角菌属(Claviceps)，命名为Claviceps sp.，已于2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO.M2014334；该菌株的基因组18s rDNA碱基序列如SEQ ID No.1所示。

本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01是采用内生真菌分离纯化技术从铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)植物活体中分离、纯化得到。

本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01可通过制备成真菌诱导子培养基或生物菌肥应用于铁皮石斛的生长中。

由本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01制备真菌诱导子培养基的方法，包括如下步骤：菌种活化→种子液培养→发酵培养→将发酵液真空抽滤，将菌丝体与液氮研磨液与滤液合并后灭菌，得到真菌诱导子→将真菌诱导子接入MS培养基中，即得真菌诱导子培养基。

作为优选方案，真菌诱导子按5％～15％体积的量接入MS培养基中。

由本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01制备生物菌肥的方法，包括如下步骤：菌种活化→种子液培养→发酵培养→将发酵液与树皮粉搅拌混匀，即得生物菌肥。

作为优选方案，按每50g树皮粉加5～15mL发酵液搅拌混匀。

作为优选方案，上述的菌种活化采用试管斜面培养，培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(固体PDA)，于28±1℃活化培养72小时。

作为优选方案，上述的种子液培养采用马铃薯葡萄糖液体培养基(液体PDA)，于28±1℃摇床培养72小时。

作为优选方案，上述的发酵培养采用马铃薯葡萄糖液体培养基(液体PDA)，于28±1℃发酵培养7天，接种量为5V％～15V％。

实验证明：采用本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01制备的真菌诱导子培养基和生物菌肥均对铁皮石斛的生长具有明显的促进作用，可用于铁皮石斛的人工种植中，以提高铁皮石斛的产量，具有显著的应用价值。

附图说明

图1为本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01在100倍显微镜下观察到的菌丝形态图。

图2为本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01在电子显微镜下观察到的菌丝形态图。

图3为本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT66G01在电子显微镜下观察到的孢子形态图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而 不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件、实验室手册中所述的条件或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1