[发明专利]花生特异启动子AhRSP与应用

说明书

技术领域

本发明涉及花生特异启动子AhRSP与应用，属于植物基因工程技术领域。

背景技术

花生是我国重要的油料作物和经济作物之一，也是单产、总产、单位面积产油量和种植业产值最高的大宗油料作物和出口创汇的优势农产品。长期以来，根部病虫害是影响花生产量和品质的主要病害，如花生的青枯病、根结线虫、蛴螬等。花生青枯病是土传性的细菌病害，该病害从根部侵入，一旦发生会给花生生产造成毁灭性性的打击，该病目前在我国南方花生产区，如广东、福建、江苏、湖南、湖北、安徽等省份普遍发生，目前在山东、辽宁、河北、河南等地也有发生，危害十分严重。花生根结线虫病是一种世界性病害，几乎所有种植花生的国家和地区都有发生，其中以山东发病最为普遍。花生感病后根的吸收功能被破坏，植株矮小发黄，结果少而稀。一般减产20％～30％，严重的可减产70％以上，甚至绝收。除了上述两种病虫害，蛴螬也是危害花生的重要虫害。蛴螬剥食花生主根使植株死亡，导致严重减产，甚至绝产的现象时有发生。但是对于上述花生根部病虫害至今没有特效药可治。利用基因工程手段将抗病、抗虫的基因导入花生中，提高花生的抗性，是减少花生病害损失的重要途径。

植物基因工程技术的成功应用不仅需要大量的优异基因资源，而且需要驱动基因高水平表达的启动子，需要在特定器官、组织中特异表达的启动子，以避免在转基因过程中的不利影响。在植物转基因载体构建过程中常用的启动子主要有2个，第一，花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子，该启动子来自花椰菜病毒，是非植物内源的组成型启动子(Odell et al.，1985)，该启动子能驱动目的基因在单、双子叶转基因植物的所有组织中高效表达(Battraw and Hall，1990)。第二，玉米ZmUbi启动子，该启动子来源于玉米泛素，是植物内源的组成型的启动子，ZmUbi启动子在单子叶植物许多的细胞中都有很高的活性，能够调控目的基因在根、叶中强烈表达(Cornejo et al.，1993)。但是，组成型启动子驱动的基因在植物的所有组织、所有生长阶段都高水平的表达，在实际应用过程中会产生一系列的问题(Napoli et al.，1990)。例如，外源基因在植物体内大量表达会产生许多的异源蛋白或者产生有害物质，这些物质在植物体内积累，会打破植物体内原有的代谢平衡，影响植物正常的生长发育，造成植物生长延缓、开花延迟、甚至不育或死亡(Pino et al.，2007)。

目前转基因的安全性受到了受到了广泛的关注，并且饱受质疑，选择有效、安全的启动子成为了当前转基因育种的热点与难点。因此，鉴定能在植物特定组织、器官以及特定时期调控基因表达的启动子进行遗传载体的构建，对于作物的遗传改良显得尤为必要。对花生而言，克隆能够在花生根中特异、高水平表达的启动子，不仅可以构建抗病、抗虫的表达载体，通过转基因获得抗病虫的转基因植株。而且，花生的抗旱、耐盐等性状也和根的生长发育相关，将通过根特异启动子将抗旱耐盐的基因在花生根中特异表达，对花生的抗旱、耐盐研究也具有积极的意义。但是目前，在可检索的资料中花生根特异启动子的报道很少，限制了利用基因工程改良花生根部性状的研究进程。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种花生特异启动子AhRSP与应用。利用特异启动子来安全有效的解决花生生产过程中的根部病虫害，提高花生抗旱、耐盐的能力。

本发明的技术方案如下：

一种花生特异启动子AhRSP，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种重组载体，插入了核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的花生特异启动子AhRSP。

一种重组细胞，含有上述花生特异启动子AhRSP或者上述重组载体。

上述花生特异启动子AhRSP、重组载体和/或重组细胞在改良花生或其他经济作物抗病虫、抗旱、耐盐转基因植物中的应用。

根据本发明优选的，上述应用，步骤如下：

构建由SEQ ID NO.1所示根特异启动子驱动目的基因的植物表达载体，通过农杆菌介导、花粉管导入或者基因枪的方法转入作物中，培育获得转基因作物。

进一步优选的，所述的目的基因为抗病、抗虫、抗盐或耐旱的基因。

进一步优选的，所述的作物为花生、大豆或苜蓿。

有益效果