[发明专利]山稻百灵谷2号和19号的分子特异性标记引物及检测方法

权利要求书

1.山稻百灵谷2号和百灵谷19号的分子特异性标记引物，所述引物序列如下：

上游引物：5′-AGCGGCCGCATCCTGAGAGA-3′，

下游引物：5′-AGCGGCCGCATCCTGAGAG-3′。

2.一种利用权利要求1所述的分子特异性标记引物对山稻百灵谷2号和百灵谷19号进行快速鉴定的方法，所述方法为：提取待测山稻品种叶片的基因组DNA作为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现730bp的特异DNA条带，则待测山稻品种为山稻百灵谷2号或百灵谷19号之一，反之则否；所述分子特异性标记引物序列为：

上游引物：5′-AGCGGCCGCATCCTGAGAGA-3′，

下游引物：5′-AGCGGCCGCATCCTGAGAG-3′。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述PCR扩增条件如下：94℃预变性6min；92℃变性40s，60℃退火40s，72℃延伸2min，共30个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为4℃。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)取待测山稻叶片，加液氮磨碎，以SDS-CTAB法提取待测山稻叶片的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增：

PCR扩增体系每20μL组成如下：

PCR扩增条件如下：

94℃预变性6min；92℃变性40s，60℃退火40s，72℃延伸2min，共30个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为4℃；

(3)取步骤(2)扩增产物5μL，与1μL 0.25％溴酚兰缓冲液混匀，点样于1.5％的琼脂糖凝胶上，于1×TAE缓冲液中、5V/cm电压下电泳，电泳结束后EB染色，于自动凝胶图像分析仪上照相，若电泳结果出现730bp的DNA条带，则待测山稻品种为山稻百灵谷2号或百灵谷19号之一，反之则否。