[发明专利]基于微流控芯片的贴壁细胞划痕制作及迁移观测方法

权利要求书

1.一种基于微流控芯片的贴壁细胞划痕制作方法，其特征在于：

所述微流控芯片中具有“Y”型结构的微沟道，包括：一主沟道；以及位于该主沟道的一侧并与该主沟道连通的两从沟道，其中，主沟道连接至细胞入口，两从沟道分别连接至第一液滴入口和第二液滴入口，且细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口均高于所述微沟道所在位置；

该贴壁细胞划痕制作方法包括：

步骤A：在微流控芯片的微沟道内采用该贴壁细胞对应的完全培养基进行片上贴壁细胞培养；

步骤B：将微流控芯片的细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口的溶液全部吸净；

步骤C：向微流控芯片的第一液滴入口和第二液滴入口同时、分别注入该贴壁细胞对应的完全培养基和胰蛋白酶溶液；

步骤D：静置预设时间；以及

步骤E：按顺序从细胞入口、第二液滴入口、第一液滴入口吸净溶液，从而在微流控芯片微沟道的底壁上形成划痕。

2.根据权利要求1所述的贴壁细胞划痕制作方法，其特征在于，所述步骤E中，从细胞入口、第二液滴入口、第一液滴入口吸净溶液的操作时间小于层流维持时间。

3.根据权利要求1所述的贴壁细胞划痕制作方法，其特征在于，所述步骤C包括：

采用多道移液枪中的两移液通道分别吸取该贴壁细胞对应的完全培养基和胰蛋白酶溶液；

将多道移液枪中的两移液通道分别对准微流控芯片的第一液滴入口和第二液滴入口，分别并同时注入该贴壁细胞对应的完全培养基和胰蛋白酶溶液。

4.根据权利要求1所述的贴壁细胞划痕制作方法，其特征在于，所述步骤B中，采用移液枪将微流控芯片的细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口的溶液全部吸净。

5.根据权利要求1所述的贴壁细胞划痕制作方法，其特征在于，所述贴壁细胞为血管平滑肌细胞，该血管平滑肌细胞对应的完全培养基为DMEM溶液。

6.根据权利要求1所述的贴壁细胞划痕制作方法，其特征在于，所述微流控芯片由聚二甲基硅氧烷和玻璃基底制备；

所述微流控芯片中，主沟道的长度为3mm，所述两从沟道的长度为4mm；所述主沟道和从沟道的横截面均为矩形；所述主沟道的宽度为800μm，高度为100μm；所述从沟道的宽度为400μm，高度为100μm；并且，所述细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口的孔径均为5mm，三者高出所述微沟道顶部8mm。

7.根据权利要求6所述的贴壁细胞划痕制作方法，其特征在于，所述步骤D中，静置的预设时间不超过5min。

8.一种基于权利要求1至7中任一项所述的贴壁细胞划痕制作方法的贴壁细胞迁移观测方法，其特征在于，包括：

对微流控芯片的微沟道进行表面修饰，以使该微沟道适宜所述贴壁细胞生长；

在微流控芯片的微沟道内进行片上贴壁细胞接种；

在微流控芯片的微沟道内进行片上贴壁细胞培养及同步化处理；

采用权利要求1至8中任一项所述的贴壁细胞划痕制作方法制作划痕；

在细胞入口和两液滴入口任意其中之一加入含有细胞迁移因子的DMEM，然后把微流控芯片放回培养箱；以及

在预设时间之后，对微流控芯片的微沟道内的贴壁细胞进行片上染色，以表征迁移细胞和未迁移细胞。

9.根据权利要求8所述的贴壁细胞迁移观测方法，其特征在于，所述在微流控芯片的微沟道内进行片上贴壁细胞接种包括：

将贴壁细胞悬液调整至预设浓度；

吸出细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口的该贴壁细胞对应的完全培养基；

同时向细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口注入贴壁细胞悬液，并静置直至细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口的液面平衡。

10.根据权利要求8所述的贴壁细胞迁移观测方法，其特征在于，在微流控芯片的微沟道内进行片上贴壁细胞培养包括：

每隔预设时间，吸出细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口的贴壁细胞的完全培养基溶液；

同时向细胞入口、第一液滴入口和第二液滴入口注入等液量新鲜的贴壁细胞的完全培养基溶液，以向贴壁细胞提供营养物质。