[发明专利]南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3、相关蛋白及其应用

说明书

本发明公开了一种南方根结线虫效应基因Miace1、Miace2和Miace3、相关蛋白及其应用，属于生物基因工程技术领域。本发明的效应基因Miace3核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其相关蛋白Miace3的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明用qPCR研究基因在线虫不同阶段表达情况；设计病毒重组RNAi载体，将该载体导入植物，在植物中产生Miace1、Miace2和MIace3的dsRNA，该植株能显著抑制根结线虫的寄生。通过本发明可获得强抗根结线虫的植物。

技术领域

本发明属生物基因工程技术领域，具体涉及南方根结线虫效应基因Miace1、Miace2和Miace3、相关蛋白及其应用。

背景技术

根结线虫是一类非常重要的植物寄生线虫，广泛分布于世界各地，能侵染超过3000种不同植物。根结线虫每年造成大概770亿美元的经济损失，随着作物复种指数的提高和设施农业的发展，根结线虫的发生和危害将会不断的加剧。由于根结线虫的根内寄生、寄主范围广泛的特性以及抗根结线虫种质资源的缺乏限制了化学防治、轮作和抗病育种等防治方法在控制根结线虫危害中的应用。因此，寻找其他有效的防治根结线虫的方法是植物生产所长期面临的艰巨任务。

RNA干扰技术（RNAi）的出现使得开发更为有效的防治根结线虫的方法成为可能。RNAi能通过靶向抑制根结线虫特定基因功能而限制根结线虫侵染、寄生和繁殖因而能高效地减少根结线虫的危害而且对其他非靶标生物较为安全。RNAi现象最早在秀丽小杆线虫中发现，随后在植物、无脊椎动物和脊椎动物中都相继发现了这种现象。RNAi技术通过dsRNA特异性的降解靶mRNA，影响或抑制该目的基因功能，从而影响该种生物的生长、发育、繁殖甚至能杀死该种生物。该技术相比其他防治方法的最大优点是能定向作用于特定的某种（某类）害虫而不会影响在该生境中的其他生物。

应用病毒载体诱导的基因沉默（VIGS）技术相对于传统的使用组织培养方法获得RNAi转基因植株更加简单快速，使得我们并不需要通过复杂的组培方法就可快速获得抗线虫植株。

发明内容

本发明的目的在于提供新的南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3。

本发明的另一目的是提供上述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因的相关蛋白MI-ACE3。

本发明的又一目的是提供上述南方根结线虫乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3的应用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

南方根结线虫（Meloidogyne incognita）乙酰胆碱酯酶基因Miace1、Miace2和Miace3，三种乙酰胆碱酯酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1-3所示；南方根结线虫乙酰胆碱酯酶蛋白MIACE1、MIACE2和MIACE3，三种乙酰胆碱酯酶基因氨基酸序列如SEQ ID NO:4-6所示。