[发明专利]一种肉桂提取物的制备方法及对白血病K562细胞的作用

说明书

技术领域

本发明属于医学技术领域，涉及一种肉桂提取物的制备方法及对白血病K562细胞的作用。

背景技术

三阳血傣因治疗肿瘤具有良效和埃及卫生部有国际合作研究[1]，其中所用到的肉桂是属于樟科家族的常绿乔木的外皮，含有多种活性成分如精油(肉桂醛，肉桂醛)，鞣质，粘液和碳水化合物。近年来，全世界对肉桂的药用功效已有很多研究，肉桂的另一种水溶性成分，MHCP(甲基羟查耳酮聚合物)，最近被认为对胰岛素模拟物的性能有影响[2]。美国农业部的研究人员使用肉桂作用于淋巴瘤，惊人的是在24小时内肉桂通过中断细胞的G2/M期来使细胞停止增殖，这意味着有丝分裂(细胞分裂)被终止，尽管在细胞周期的合成期(S)不是这样。但是肉桂可能是通过抑制细胞的某些可促进有丝分裂的磷酸酶[3]，因此，研究这些致病因素，针对可能有助于预防白血病的关键来实现。在以前的报告中有报道，肉桂提取物具有抗肿瘤作用，也具有通过抑制NFkappaB的AP1和小鼠黑色素瘤模型联系起来来增强促凋亡活性[4]。

近年来，利用人结肠癌上皮细胞Caco-2模型在药物研究方面因其特殊的结构和生理生化作用取得了令人鼓舞的进展。该细胞单层模型和人体小肠上皮细胞相类似。采用中药经transwell转运池Caco-2细胞模型吸收转运后的过滤液作用于研究的白血病细胞，可替代中药血清学方法，更能体现中药在体内的真正作用情形。

发明内容

本发明揭示肉桂提取物对白血病K562细胞的作用。 

肉桂提取物的制备方法按照以下步骤：

步骤1：肉桂的干燥粉末，用乙醇：水为80:20作为溶剂，萃取三次；

步骤2：减压回流除去溶剂后，得到残余物；

步骤3：将残余物溶解在丙酮中，过滤，将丙酮溶液在真空中蒸发得到的丙 酮可溶提取物，将其悬浮在水中；

步骤4：然后用石油醚和EtOAc利用沸点不同进行分离，得到水溶性提取物；

步骤5：水溶性提取物经硅胶柱层析，用氯仿：甲醇：水为80:20:2.5得到肉桂提取物。

附图说明

图1A(-)-(7′S,8S,8′R)-4,4′-dihydroxy-3,3′,5,5′

-tetramethoxy-7′,9-epoxylignan-9′-ol-7-one；

图1B(-)-lyoniresinol 3α-O-β-d

-glucopyranoside；

图1C3,4,5-trimethoxyphenolβ-d–apiofuranosyl(1→6)-β-d

-glucopyranoside；

图2A扫描电子显微镜15000×；

图2B扫描电子显微镜3000×；

图2C透射电子显微镜20000×；

图3A普萘洛尔标准品；

图3B普萘洛尔经transwell吸收；

图3C阿替洛尔标准品；

图3D阿替洛尔经transwell吸收；

图4A:肉桂提取物A标准品；

图4B:经transwell吸收的附子提取物肉桂提取物A；

图4C:肉桂提取物B标准品；

图4D：经transwell吸收的附子提取物肉桂提取物B；

图4E:肉桂提取物C标准品；

图4F:经transwell吸收的附子提取物肉桂提取物C；

图5A:肉桂提取物A；

图5B:肉桂提取物B；

图5C:肉桂提取物C；

图6A阴性对照组的K562细胞；

图6B50μM肉桂提取物A作用K562细胞72h；

图6C50μM肉桂提取物B作用K562细胞72h；

图6D50μM肉桂提取物C作用K562细胞72h；

图7K562细胞系各阶段细胞周期分布和DNA含量分析；

图850μM和75μM肉桂提取物A,B,C作用K562细胞72h对细胞周期的影响；

图9A肉桂提取物作用K562细胞72h对细胞凋亡的影响,阴性组；

图9B肉桂提取物作用K562细胞72h对细胞凋亡的影响,50μM肉桂提取物；

图9C肉桂提取物作用K562细胞72h对细胞凋亡的影响,75μM肉桂提取物；

图10A:K562细胞分化抗原图，PE-CD36；

图10B:K562细胞分化抗原图，FITC-CD13；