[发明专利]一种透明质酸共价连接靶向性穿膜肽和活性药物的水溶性前药及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种靶向性水溶性前药及其制备方法，尤其涉及一种透明质酸共价连接靶向性穿膜肽和活性药物的水溶性前药及其制备方法，属于药物制剂领域。

背景技术

水溶性前药应用具有生物降解性的高分子材料，通过共价键连接疏水部分和亲水部分，由于水溶性部分比例较大，且能够将疏水药物分子物理包裹在载体中，使得整体具有良好亲水性。肿瘤血管通透性高又缺乏有效的淋巴引流，大分子结构能够进入肿瘤组织，又被肿瘤组织截留。这种使大分子在肿瘤组织增强渗透和滞留的效应称为EPR效应(enhanced permeability and retention effect)。自组装形成的药物递送系统能够利用高分子载体的EPR效应达到被动靶向的作用。

透明质酸(hyaluronic acid，HA)是一种大分子糖胺聚糖，是构成细胞外基质(ECM)和细胞间质(ICM)的主要成分，尘物相容性好。HA基本上为化学惰性物质，同大多数化学物质具有相容性。且细胞膜HA结合蛋白(膜表面受体)CD44在肿瘤细胞表面的含量比正常细胞高出多倍，因此HA有一定的靶向肿瘤细胞的功能。HA作为载体材料，能够控制药物释放速度，起到缓释的效果。

穿膜肽(cell-penetrating peptides，CPPs)是一类具有高效穿过细胞膜而不损伤细胞膜结构和功能特点的多肽。一般具有水溶性，故性质比较稳定。多数研究证明CPPs在常规的用量范围内基本没有毒性。CPPs可以携带多种活性物质进入细胞，已经在介导基因、蛋白质、多肽、小分子、纳米颗粒和脂质体等穿透各种细胞膜方面发挥了巨大作用。tLyP-1为水溶性穿膜肽，具有良好的穿透细胞膜的能力，在介导载药脂质体、纳米粒等穿透细胞膜治疗疾病方面均有相关研究应用。其序列为CGNKRTR。

发明内容

本发明提供了一种透明质酸共价连接靶向性穿膜肽和活性药物的水溶性前药，它主要是由以下重量份比例的原料所制成：

1份活性药物、7.5-15份透明质酸、0.375-0.75份靶向性穿膜肽。

优选地，上述靶向性水溶性前药主要是由以下重量份比例的原料所制成：

1份活性药物、7.5-15份透明质酸、0.375-0.75份靶向性穿膜肽。

优选地，所述的活性药物为紫杉醇。

优选地，所述的靶向性穿膜肽为tLyP-1。

优选地，所述的透明质酸为分子量为5000、9000、12000透明质酸中的一种。

本发明还提供了上述靶向性水溶性前药的制备方法，它主要是由如下步骤所组成：

(1)用甲酰胺溶液溶解透明质酸，加入4-二甲氨基吡啶催化，加入用N，N-二甲基甲酰胺溶解的活性药物，55-60℃下反应6h；

(2)透析除去杂质；冻干后水复溶，加入靶向性穿膜肽，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺催化，25℃反应4h；

(3)透析，过滤；冻干，即得。

相对于现有技术，本发明所得的靶向性水溶性前药，由于采用透明质酸作为主要载体材料、采用靶向性穿膜肽修饰、连接活性药物成前药：(1)载体材料生物相容性好；(2)水溶性好，结构更加稳定；(3)冷冻干燥不需要添加冻干保护剂，所得冻干粉，再溶解后，与冷冻干燥前相比，溶解性、载药量变化很小；(4)具有对于肿瘤细胞的靶向性，且穿透细胞膜的能力增强。

附图说明

图1透明质酸的核磁共振氢谱图；

图2水溶性前药的核磁共振氢谱图；

图3透明质酸的红外光谱图；

图4不含有靶向穿膜肽的水溶性前药的红外光谱图；

图5连接靶向穿膜肽的水溶性前药的红外光谱图

具体实施方案：

实施例1

处方：1mg紫杉醇、15mg分子量9000透明质酸、0.75mg tLyP-1。

制备工艺： 

(1)用3ml甲酰胺溶液溶解透明质酸，加入5mg 4-二甲氨基吡啶催化，加入用50ul N，N-二甲基甲酰胺溶解的活性药物，55-60℃下反应6h；

(2)透析除去杂质；冻干后水复溶，加入1.5mg tLyP-1，加入6mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1.2mg N-羟基琥珀酰亚胺催化，25℃反应4h；

(3)透析，0.22um微孔滤膜过滤；冻干，即得。

实施例2

处方：1mg紫杉醇、7.5mg分子量9000透明质酸、0.75mg tLyP-1。